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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:(1)在HSV-1感染BV2細(xì)胞建立的單純皰疹病毒性腦炎模型中,觀察TLR2信號(hào)通路各分子及下游炎性因子的變化,進(jìn)一步明確TLR2通路在其發(fā)病過程中的作用;(2)研究在正常BV2細(xì)胞、單純皰疹病毒性腦炎模型中,柯里拉京對(duì)TLR2信號(hào)通路、下游炎性因子的干預(yù)作用,探索柯里拉京發(fā)揮抗炎作用的機(jī)制。
方法:(1)培養(yǎng)BV2細(xì)胞系、Vero細(xì)胞系,用Vero細(xì)胞擴(kuò)增HSV-1,提取HSV-1,10稀釋病毒共8個(gè)滴度梯度,對(duì)BV2
2、細(xì)胞進(jìn)行滴定,記錄細(xì)胞形態(tài)變化,采用Reed-Muench法計(jì)算出病毒TCID50滴度,以100TCID滴度HSV-1感染BV2細(xì)胞系建立單純皰疹病毒性腦炎模型,模型組、正常對(duì)照組分別用ElISA方法檢測(cè)炎癥因子TNF-α、IL-6的表達(dá)量,用 RT-PCR方法檢測(cè) TLR2及下游信號(hào)通路中TIRAP、MyD88、IRF-5、P38、NEMO mRNA相對(duì)表達(dá)水平,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面TLR2的表達(dá)水平,用Western-blot方
3、法檢測(cè)TIRAP、MyD88、P38、PP38、NEMO蛋白相對(duì)表達(dá)水平。(2)配制柯里拉京溶液,2倍稀釋8個(gè)濃度梯度對(duì)BV2細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞活性以觀察柯里拉京的細(xì)胞毒性。用柯里拉京分別干預(yù)正常BV2細(xì)胞、HSE模型細(xì)胞,用上述方法檢測(cè)TLR2及下游各分子的變化。
結(jié)果:(1)HSV-1感染小膠質(zhì)細(xì)胞BV2造模成功,單純皰疹病毒性腦炎模型組相對(duì)于對(duì)照組TLR2信號(hào)通路下游炎性因子TNF-α、IL-6分泌明顯增
4、多,TLR2及下游信號(hào)通路中TRIAP、MyD88、IRF5、P38、NEMO的mRNA表達(dá)量升高,細(xì)胞表面 TLR2增多,TRIAP、MyD88、P38、PP38、NEMO蛋白表達(dá)水平增高;差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)柯里拉京干預(yù)正常BV2細(xì)胞后,信號(hào)通路各分子TLR2、TIRAP、MyD88、IRF-5、P38、NEMO的mRNA表達(dá)量下降(P<0.05),炎性因子IL-6分、TNF-α分泌量及細(xì)胞表面TLR2受體表達(dá)
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