柯里拉京對單純皰疹病毒性腦炎發(fā)病過程中TLR2通路的干預作用機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 HSV-1感染小膠質細胞后對Toll樣受體的影響
　　目的:研究HSV-1感染小膠質細胞后Toll樣受體表達情況。
　　方法:小膠質細胞系BV2細胞接種HSV-1制造細胞模型，使用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測HSV-1感染組與對照組TLR2、TLR3、TLR9mRNA表達。
　　結果:病毒感染后，TLR2、TLR3、TLR9mRNA均明顯上升，與對照組比較差異有統(tǒng)計

2、學意義(P<0.01)。
　　結論:TLR2、TLR3、TLR9參與了BV2小膠質細胞對HSV-1病毒的識別。
　　第二部分 HSV-1感染BV2細胞后對TLR2及下游通路信號分子的影響
　　目的:研究HSV-1感染小膠質細胞后對TLR2信號通路的影響。
　　方法:小膠質細胞系BV2接種HSV-1制造細胞模型，Malp2刺激BV2細胞作為陽性對照組，采用流式細胞術檢測TLR2蛋白表達；Western blot檢測

3、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表達；實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表達；ELISA檢測IL-6、TNF-α的表達。
　　結果:1、BV2細胞被Malp2刺激后，TLR2及下游信號通路因子表達均明顯升高，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。2、HSV-1感染BV2細胞后，TLR2及下游信號通路因子表達明顯

4、升高，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論:TLR2及下游信號通路因子介導了HSV-1感染BV2細胞的免疫炎性反應。
　　第三部分 柯里拉京對HSV-1感染后BV2細胞TLR2通路的調節(jié)作用
　　實驗1柯里拉京對HSV-1感染正常BV2細胞TLR2通路的調節(jié)作用
　　目的:研究柯里拉京對HSV-1感染后BV2細胞TLR2通路的調節(jié)作用。
　　方法:小膠質細胞系BV2接種HSV-1制造

5、細胞模型，Malp2刺激BV2細胞作為陽性對照組，細胞受HSV-1和Malp2干預后柯里拉京治療24h，采用流式細胞術檢測TLR2蛋白表達；Western blot檢測 TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表達；實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測 TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表達；ELISA檢測IL-6、TNF-α的表達。
　　結果:1、柯里拉京治療受M

6、alp2刺激的BV2細胞后，TLR2及下游信號通路分子表達均下降，與生理鹽水治療組比較（P<0.05）。2、柯里拉京治療受HSV-1感染的BV2細胞后，TLR2及下游信號通路分子表達均下降，與生理鹽水治療組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論:柯里拉京可以抑制HSV-1感染BV2細胞后激活的TLR2信號通路。
　　實驗2柯里拉京抑制HSV-1感染后BV2細胞TLR2通路機制研究
　　目的:研究柯里拉京抑制H

7、SV-1感染后BV2細胞TLR2通路的機制。
　　方法:通過慢病毒載體使BV2細胞TLR2過表達，HSV-1感染BV2細胞后柯里拉京治療24h；通過小分子RNA使BV2細胞TLR2表達沉默，HSV-1感染BV2細胞后柯里拉京治療24h結果，采用Western blot、Real-time PCR和ELISA檢測TLR2下游信號通路分子表達情況。
　　結果:1、TLR2過表達時，柯里拉京治療受HSV-1感染的BV2細胞后，與生

8、理鹽水治療組比較， TLR2下游信號通路分子表達均下降（P<0.05）。2、TLR2表達沉默時，柯里拉京治療受HSV-1感染的BV2細胞后，與生理鹽水治療組比較：TIRAP變化不明顯（P>0.05）；MyD88、TRAF6表達上升（P<0.05）；P38、NEMO、NF-к Bp65、IL-6、TNF-α表達下降（P<0.05）。
　　結論:柯里拉京對TIRAP、MyD88、TRAF6的抑制作用需要TLR2的參與，同時柯里拉京可能

9、通過其他的Toll樣受體或者直接對P38、NEMO、NF-к Bp65、IL-6、TNF-α產生抑制作用。
　　第四部分 柯里拉京對單純皰疹病毒性腦炎小鼠TLR2通路的影響
　　目的:研究柯里拉京通過抑制TLR2通路治療單純皰疹病毒性腦炎的可行性。
　　方法:Balb/c小鼠顱內注射HSV-1制造小鼠單純皰疹病毒性腦炎模型，隨機分成：正常組、柯里拉京組、Malp2+鹽水治療組、Malp2+柯里拉京治療組、HSV-1+鹽

10、水治療感染組、HSV-1+柯里拉京治療組。采用HE染色觀察腦組織形態(tài)學；免疫組化檢測TLR2表達；實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表達；Western blot檢測TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表達；ELISA檢測IL-6、TNF-α的表達。
　　結果:1、柯里拉京干預組小鼠腦組織病理改變減輕2、 Malp2+鹽水治療