a-防卸素對(duì)單純皰疹病毒性角膜炎的影響.pdf

1、目的:
　　 通過建立小鼠單純皰疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)動(dòng)物模型,觀察小鼠角膜中α-防御素的分布及變化,并建立人角膜上皮細(xì)胞感染單純皰疹病毒(herpes simplex virvs,HSV)的細(xì)胞模型,觀察α-防御素對(duì)HSK的影響。
　　 方法:
　　 選用近交系Balb/c小鼠共90只,構(gòu)建小鼠HSK動(dòng)物模型,按照隨機(jī)數(shù)字表法,隨機(jī)分為3組:正常組10只,不做

2、任何處理:對(duì)照組40只,僅對(duì)該組小鼠行角膜“十”字劃傷,接種生理鹽水;實(shí)驗(yàn)組40只,該組小鼠在給予“十”字劃傷后,將Ⅰ型單純皰疹病毒(HSV-1)滴入結(jié)膜囊,按摩30s。裂隙燈顯微鏡觀察各組小鼠接種病毒后的角膜情況;角膜組織病理切片HE染色觀察病毒接種后3、5、7、15、30天角膜炎癥情況;冰凍切片免疫熒光檢測(cè)病毒接種后3、5、7、15、30天病毒分布及α-防御素表達(dá)情況。同時(shí)選用人角膜上皮細(xì)胞(HCEC)構(gòu)建HSV-1感染的細(xì)胞模型,

3、人角膜上皮細(xì)胞在96孔板中培養(yǎng)至單層后,分不同階段加入人重組α-防御素-1及HSV-1,觀察不同處理的細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE),并以此為指標(biāo)比較人重組α防御素-1對(duì)HSV-1感染細(xì)胞的綜合作用。
　　 結(jié)果:
　　 1、裂隙燈觀察術(shù)后小鼠,術(shù)后7天小鼠明顯發(fā)病,眼瞼腫脹、脫毛,角膜上皮熒光素鈉染色見線狀或點(diǎn)狀著色,術(shù)后15天,小鼠角膜基本恢復(fù)透明,熒光素鈉染色無著色,術(shù)后30天,部分小鼠

4、角膜基質(zhì)層見瘢痕?？梢娦∈蠼悄ぁ笆弊謩澓鄯ń⒌腍SK的模型有很好的可操作性和重復(fù)性,模型成功率為84.0％,可以用于α-防御素的研究。
　　 2、免疫熒光檢測(cè)可見病毒感染角膜后不同時(shí)間均可在角膜內(nèi)檢測(cè)到α-防御素有不同程度的表達(dá),以感染后7天表達(dá)量最高,角膜上皮、基質(zhì)及內(nèi)皮均可見熒光出現(xiàn),其他時(shí)間熒光主要分布于角膜上皮層。并且,角膜內(nèi)α-防御素的表達(dá)分布與HSV-1的分布大致相同。
　　 3、通過CPE法觀察α-防御

5、素對(duì)人角膜上皮細(xì)胞感染HSV-1的作用,發(fā)現(xiàn)α-防御素在直接滅活HSV-1及抑制感染后HSV-1的生物合成方面有較明顯的作用,但是其對(duì)HCEC的保護(hù)作用則不是很明顯,并且隨著時(shí)間的延長(zhǎng),添加α-防御素因素的實(shí)驗(yàn)組CPE與單純行HSV-1感染的對(duì)照組CPE現(xiàn)象趨于一致。
　　 結(jié)論:
　　 1、角膜“十”字劃痕法建立的HSK的小鼠模型有很好的可操作性和重復(fù)性,可以用于α-防御素的研究。
　　 2、α-防御素在正常的