活性維生素D通過調(diào)節(jié)DN大鼠巨噬細(xì)胞M1-M2活化表型防治足細(xì)胞損傷.pdf

1、目的：巨噬細(xì)胞的激活是糖尿病腎病(DN)早期足細(xì)胞損傷的中心環(huán)節(jié)。研究表明，巨噬細(xì)胞活化狀態(tài)和功能的兩面性決定腎臟疾病的不同轉(zhuǎn)歸。巨噬細(xì)胞經(jīng)典M1型活化介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，參與組織損傷;替代途徑M2型活化具有組織修復(fù)作用。因此，找到調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活化狀態(tài)和功能的方法是早期防治DN足細(xì)胞損傷的關(guān)鍵。近期臨床研究發(fā)現(xiàn)，活性維生素D(VD)對(duì)DN具有顯著的腎保護(hù)作用，但其機(jī)制尚未闡明。本研究通過建立STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠模型，探討活性維生素D能否

2、通過調(diào)節(jié)M1/M2巨噬細(xì)胞表型活化從而發(fā)揮DN足細(xì)胞保護(hù)作用。
　　方法:將SD雄性大鼠隨機(jī)分為四組:對(duì)照組一(NC-1組)、對(duì)照組二(NC-2組，對(duì)照+VD干預(yù)組)、DN組、DN+VD干預(yù)組(VD組，骨化三醇0.1μg·kg-1·d-1灌胃)，定期檢測(cè)血糖、體質(zhì)量，收集尿標(biāo)本，分別于干預(yù)后8w、14w、18w末處死動(dòng)物，檢測(cè)Scr、BUN和24小時(shí)尿蛋白變化;PAS染色觀察腎臟病理改變;免疫組化法檢測(cè)腎組織CD68+巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)

3、數(shù)量;Western Blot檢測(cè)nephrin、podocin、CD68以及M1巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)志物iNOS、TNF-α和M2巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)志物CD163、Arg-1、MR表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)與兩對(duì)照組相比，DN組Scr、BUN、24小時(shí)尿蛋白及腎小球系膜基質(zhì)增生程度顯著增加，podocin、nephrin蛋白表達(dá)下降（均P＜0.05）。VD干預(yù)后能明顯改善上述病理現(xiàn)象（均P＜0.05）。(2)與兩對(duì)照組相比，DN組腎組織

4、CD68+巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量明顯增加，呈時(shí)間依賴性。VD干預(yù)后能顯著減少CD68+巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量(P＜0.05)。(3)進(jìn)一步確定腎組織巨噬細(xì)胞M1/M2活化表型發(fā)現(xiàn)，8w、14w、18w末DN組iNOS、TNF-α蛋白表達(dá)較兩對(duì)照組顯著升高（均P＜0.05），VD干預(yù)后能明顯抑制同期DN腎組織iNOS、TNF-α表達(dá)（均P＜0.05）;8w、14w末VD組CD163、Arg-1、MR蛋白表達(dá)與DN組相比無顯著差異（均P＞0.05），1

5、8w末VD組CD163、Arg-1、MR蛋白表達(dá)較DN組顯著升高（均P＜0.05），CD163/CD68蛋白表達(dá)比例顯著增加(P＜0.05)。(4)相關(guān)分析顯示，M1標(biāo)志物iNOS與nephrin、podocin蛋白表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.707，P＜0.01;r=-0.712，P＜0.01);M2標(biāo)志物CD163與nephrin、podocin蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)(r=0.627, P＜0.01;r=0.613, P＜0.01)。