睪丸組織移植對(duì)內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠學(xué)習(xí)記憶的保護(hù)作用.pdf

1、腦衰老(Brain aging)是一種增齡性腦功能的慢性退行性病變，也是人體整體衰老的重要組成部分。臨床主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶減退、認(rèn)知功能障礙和思維紊亂等。隨著我國(guó)人口老齡化的加劇，腦衰老的發(fā)病率正在逐年上升，而且已有低齡化趨勢(shì)，這不僅影響到中老年人的生活質(zhì)量，而且還給社會(huì)和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。但是有關(guān)腦衰老具體的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，目前全世界尚未在治療上取得突破性的進(jìn)展。因此，需要深入探尋腦衰老的發(fā)病機(jī)制和研發(fā)延緩腦衰老的有效治療方法

2、和藥物，為臨床治療腦衰老提供有效的依據(jù)。
　　目的：⑴研究?jī)?nèi)分泌衰退對(duì)腦衰老的學(xué)習(xí)記憶障礙的影響；⑵研究睪丸組織移植手術(shù)對(duì)內(nèi)分泌衰退的改善作用；⑶研究?jī)?nèi)分泌衰退對(duì)海馬神經(jīng)元和雄激素受體信號(hào)通路的影響，以及睪丸組織移植手術(shù)的保護(hù)作用。
　　方法：將40只昆明種雄性小鼠隨機(jī)分為四組:假手術(shù)組、去勢(shì)組、雄激素對(duì)照組(30 mg/kg)和睪丸組織塊移植組。切除小鼠雙側(cè)睪丸，建立內(nèi)分泌衰退小鼠模型。將睪丸組織塊植入已去勢(shì)小鼠背部皮下或

3、皮下肌肉層，建立同種異體睪丸組織移植模型。造模后，雄激素組小鼠灌胃治療三個(gè)月，其他各組給予等量生理鹽水。治療結(jié)束后，取出移植組小鼠背部移植物進(jìn)行肉眼和組織學(xué)觀察;稱量并計(jì)算小鼠性腺器官（前列腺和精囊腺）指數(shù);ELISA法測(cè)量各組小鼠血清睪丸酮水平;Moms水迷宮觀察小鼠行為學(xué)變化;HE染色觀察海馬CA1區(qū)形態(tài)學(xué)改變;蛋白免疫印跡檢測(cè)小鼠腦內(nèi)雄激素受體和凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9)的表達(dá);RT

4、-PCR法檢測(cè)小鼠腦內(nèi)雄激素受體和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：①睪丸組織移植物生長(zhǎng)狀況和形態(tài)觀察:通過肉眼觀察，發(fā)現(xiàn)睪丸組織塊與周圍組織之間建立了血管連接;顯微鏡觀察病理切片，可以發(fā)現(xiàn)移植物在形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞組成上基本保持完整，在多個(gè)生精小管截面中可觀察到生精細(xì)胞，其中包括圓形精子細(xì)胞和長(zhǎng)形精子細(xì)胞，但精原細(xì)胞和精母細(xì)胞很少能看到；②間質(zhì)見血竇和少量間質(zhì)細(xì)胞；③睪丸組織移植對(duì)內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠性腺器官的影響:與假手術(shù)組相比

5、，去勢(shì)組小鼠性腺器官系數(shù)明顯下降(P＜0.01);與去勢(shì)組相比，移植組小鼠性腺器官系數(shù)顯著增加(P＜0.01);與雄激素組相比，移植組小鼠性腺器官系數(shù)無(wú)明顯差異（P＞0.05）；④睪丸組織移植對(duì)內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠內(nèi)分泌水平的影響:與假手術(shù)組相比，去勢(shì)組小鼠血清睪丸酮含量明顯下降(P＜0.01);與去勢(shì)組相比，移植組小鼠血清睪丸酮水平顯著增加(P＜0.01);與雄激素組相比，移植組小鼠血清睪丸酮含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；⑤睪

6、丸組織移植對(duì)內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠行為學(xué)的影響:與假手術(shù)組相比，去勢(shì)組小鼠的潛伏逃逸期縮短，游泳路程明顯增加，穿越平臺(tái)的次數(shù)也大幅度地下降(P＜0.01);與去勢(shì)組小鼠相比，移植組小鼠潛伏逃逸期延長(zhǎng)，游泳路程顯著降低，穿越平臺(tái)的次數(shù)也顯著性升高(P＜0.01);與雄激素組相比，移植組小鼠潛伏逃逸期、游泳路程和穿越平臺(tái)的次數(shù)均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。⑥睪丸組織移植對(duì)內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響:從腦組織切片HE染色結(jié)果來

7、看，假手術(shù)組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元有4～6層，排列緊密，整齊和均勻，細(xì)胞層次分明，結(jié)構(gòu)完整，核大而圓，核仁清晰可見;去勢(shì)組海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列稀疏而松散，部分區(qū)域細(xì)胞有缺失或裂縫，細(xì)胞間隙大，核固縮，只有1～2層神經(jīng)元，細(xì)胞數(shù)量明顯減少;雄激素組和移植組海馬CA1區(qū)形態(tài)結(jié)構(gòu)較去勢(shì)組均有好轉(zhuǎn)，神經(jīng)元排列整齊有序，細(xì)胞數(shù)量明顯增多；⑦睪丸組織移植對(duì)內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠激素受體和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響:與假手術(shù)組相比，去勢(shì)組小鼠Bax、Caspa

8、se-3和Caspase-9蛋白表達(dá)顯著增加，AR和Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與去勢(shì)組相比，移植組Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)顯著減少，AR和Bcl-2蛋白表達(dá)明顯增加，差異極顯著(P＜0.01);與雄激素組相比，移植組腦內(nèi)AR和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)均無(wú)明顯差異(P＞0.05)；⑧睪丸組織移植對(duì)內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠雄激素受體和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響:與假手術(shù)組相比，去勢(shì)組小鼠A

9、R和凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)明顯減弱，表現(xiàn)為弱條帶，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與去勢(shì)組相比，移植組AR和凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)，表現(xiàn)為高亮度條帶，差異極顯著(P＜0.01)。與雄激素組相比，移植組腦內(nèi)AR和凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)量無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：⑴切除小鼠雙側(cè)睪丸后，性腺器官指數(shù)大大下降，血清睪丸酮含量也顯著減少，證明了內(nèi)分泌衰退小鼠模型建立比較成功；⑵移植睪丸組織塊后，發(fā)現(xiàn)組織

10、移植物與周圍組織建立血管聯(lián)系，病理形態(tài)保持正常，性腺器官重量明顯加重，血清睪丸酮含量大幅度上升，證明了同種異體睪丸組織移植模型建立比較成功；⑶睪丸組織移植與雄激素雄激素替代療法效果相當(dāng)，可以代替服用雄激素改善腦衰老引起的學(xué)習(xí)記憶障礙；⑷睪丸組織移植可能是通過分泌內(nèi)源性睪丸酮，結(jié)合腦內(nèi)雄激素受體，調(diào)控神經(jīng)元凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，上調(diào)Bcl-2蛋白水平，降低Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表達(dá)量，抑制大腦神經(jīng)元凋亡，進(jìn)而改