抗稻瘟病的燼灰吸水鏈霉菌D-2變異菌株的產(chǎn)生及其應(yīng)用研究.pdf

1、稻瘟病(Magnaporthgrisea)、紋枯病(Rhizoctonia.sonali)、白葉枯病(Xanthomonascampestrispv.oryzae)并稱水稻三大病害。其中，稻瘟病位列三大病害之首。其生理小種多樣化，遺傳變異快，分類多樣，有節(jié)瘟、穗頸瘟、葉瘟等類型。由于稻瘟病菌常在種子和稻桿上過(guò)冬，如前季水稻收割后，未能及時(shí)清除稻桿，就會(huì)給稻瘟病菌一個(gè)越冬場(chǎng)所，來(lái)年稻瘟病就有可能大面積爆發(fā)。稻瘟病菌的潛伏期在客觀上也使得在

2、癥狀能夠在大田鑒別認(rèn)識(shí)時(shí)，稻瘟病可能已經(jīng)開始流行。這些都給防治工作帶來(lái)了極大的困難。每年，稻瘟病都給世界水稻生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失，甚至顆粒無(wú)收。而傳統(tǒng)防治稻瘟病多采用化學(xué)農(nóng)藥，但近年來(lái)，隨著對(duì)稻瘟病產(chǎn)生抗藥性的研究以及人們對(duì)環(huán)境保護(hù)的重視，可持續(xù)發(fā)展已經(jīng)成為一個(gè)人們不得不面對(duì)的嚴(yán)峻問(wèn)題。而生物農(nóng)藥由于其具有低毒高效，選擇性強(qiáng)，低殘留甚至無(wú)殘留的特點(diǎn)，受到人們的廣泛重視。生物農(nóng)藥中很大一部分是農(nóng)用抗生素，而鏈霉菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物又在農(nóng)用抗生

3、素中占有重要地位，多種鏈霉菌次生代謝產(chǎn)物被研制成農(nóng)用抗生素在生產(chǎn)上大力推廣，如井岡霉素、春雷霉素、中生菌素等在植物病蟲害防治方面取得的效果得到了大家的公認(rèn)。本文針對(duì)稻瘟病這一嚴(yán)重危害水稻生產(chǎn)的世界性病害，從原有燼灰吸水鏈霉菌菌株的基礎(chǔ)上，通過(guò)誘變育種的方法，篩選到了比原始菌株防效更好的突變菌株，并進(jìn)行了田間試驗(yàn)，相關(guān)生物學(xué)活性，以及通過(guò)細(xì)胞學(xué)手段觀察其對(duì)稻瘟病菌絲致畸作用等研究，結(jié)果如下： 1.采用物理誘變法，化學(xué)誘變法和復(fù)合誘

4、變法對(duì)燼灰吸水鏈霉菌(Streptomycescinereohygroscopicus)原始菌株D-2孢子懸液進(jìn)行誘變，獲得對(duì)稻瘟病(Magnaporthgrisea)抑制作用優(yōu)于原始菌株的兩個(gè)突變菌株，分別是用紫外線照射處理60s和DES(硫酸二乙酯)2％的濃度處理1.5h得到的菌株。這兩個(gè)突變菌株對(duì)西瓜枯萎病(Fusariumoxysporumf.spniveum)的抑制作用也要優(yōu)于原始菌株，其中DES(硫酸二乙酯)2％的濃度處理1

5、.5h得到的菌株對(duì)兩種病原菌的抑制作用都是最好的，抑菌帶寬度分別達(dá)18mm和8mm。 2.選用不同的溶劑和乳化劑，在不同的稀釋倍數(shù)下交叉配制成18種農(nóng)藥，同時(shí)設(shè)農(nóng)藥鐵菌和清水對(duì)照，進(jìn)行小區(qū)田間試驗(yàn)，結(jié)果表明：選用丙酮作溶劑，吐溫80作乳化劑，在稀釋倍數(shù)為50倍時(shí)配制的農(nóng)藥和選用異丙醇作溶劑，吐溫80作乳化劑，在稀釋倍數(shù)為250時(shí)配制的農(nóng)藥防效明顯優(yōu)于其它組合，其中，又以丙酮作溶劑，吐溫80作乳化劑，在稀釋倍數(shù)為50倍時(shí)配制的農(nóng)藥

6、防效最好，防效達(dá)87.29％。在所有處理中，以丙酮為溶劑配制的農(nóng)藥的防效要明顯優(yōu)于分別以異丙醇和甲苯為溶劑配制的農(nóng)藥，且防效較穩(wěn)定，平均防效＞80％。其中，以丙酮為溶劑，吐溫80為乳化劑配制的農(nóng)藥，防效＞80％，且病情指數(shù)＜0.4，穩(wěn)定性較好；以吐溫80為乳化劑配制的農(nóng)藥的防效一般要優(yōu)于以農(nóng)乳500+農(nóng)乳600為乳化劑配制的農(nóng)藥，防效大都在50％以上，病情指數(shù)＜0.5，而以農(nóng)乳500+農(nóng)乳600為乳化劑配制的農(nóng)藥防效有高有低，病情指數(shù)也

7、不一致。以稀釋倍數(shù)作為研究對(duì)象時(shí)，發(fā)現(xiàn)在同一編號(hào)下的三個(gè)處理的防效多以稀釋50倍和稀釋100倍為最好，個(gè)別處理在稀釋250倍的情況下才表現(xiàn)出最佳防效。 3.從培養(yǎng)基種類，供氧條件，PH條件，培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等幾個(gè)方面對(duì)誘變菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：分別以NA作培養(yǎng)基，供氧量為40ml，PH為8，培養(yǎng)溫度為36℃，培養(yǎng)時(shí)間為48h培養(yǎng)時(shí)，誘變菌株的OD值達(dá)到最大，分別為0.237，0.132，0.271，0.076，

8、2.083。但其拮抗活性的表現(xiàn)與OD值的高低不太一致。拮抗活性大小依研究對(duì)象的不同而發(fā)生變化，以培養(yǎng)基作為研究對(duì)象時(shí)，LB＞PDA＞NA；以供氧條件作為研究對(duì)象時(shí)，40ml＞160ml；以PH值作為研究對(duì)象時(shí)，PH5＞PH7＞PH6，而OD值最到的PH8，基本不表現(xiàn)拮抗活性；以培養(yǎng)時(shí)間作為研究對(duì)象時(shí)，任何一個(gè)處理表現(xiàn)出較弱的拮抗活性；以培養(yǎng)溫度作為研究對(duì)象時(shí)，只有OD值最高的36℃這個(gè)處理表現(xiàn)出較強(qiáng)的拮抗活性。 4.采用電鏡掃描