抗凋亡與增殖抑制策略在雜交瘤細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)中應(yīng)用的研究.pdf

1、雜交瘤細(xì)胞H18由該室制備,分泌單抗Hab18,特異性結(jié)合肝癌相關(guān)抗原Hab18G/CD147分子.為了提高雜交瘤細(xì)胞在生物反應(yīng)器培養(yǎng)中抗體的產(chǎn)量,該實(shí)驗(yàn)欲從抗凋亡及細(xì)胞增殖抑制兩方面著手研究,以求提高雜交瘤細(xì)胞分泌抗體的產(chǎn)量,并整合上述因素,在5L生物反應(yīng)器中進(jìn)行中試培養(yǎng).第一部分鼠bcl-X<,L>基因的克隆及在CHO細(xì)胞中的表達(dá)用Trizol提取BALB/c小鼠腦組織總RNA,反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增鼠bcl-X<,L>全長(zhǎng)cDNA序列,

2、并將所克隆的序列與pGEMT載體連接,進(jìn)行測(cè)序;為了快速檢測(cè)所獲的bcl-X<,L>全長(zhǎng)cDNA序列是否能完全表達(dá),將其與pEGFP載體連接,構(gòu)建pEGFP-bcl-X<,L>重組融合表達(dá)質(zhì)粒;用脂質(zhì)體法將重組真核表達(dá)載體pEGFP-bcl-X<,L>轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞,用熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中Bcl-X<,L>-EGFP融合蛋白的表達(dá).第二部分H18雜交瘤細(xì)胞株抗凋亡能力的改造及鑒定.利用PCR從pGEM-T-bcl-X<,L>質(zhì)粒中

3、獲得bcl-X<,L>基因,構(gòu)建真核表達(dá)載體pEF-bcl-X<,L>,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染雜交瘤細(xì)胞H18,G418篩選穩(wěn)定表達(dá)株,Western blotting檢測(cè)目的蛋白表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測(cè)Bcl-X<,L>提高雜交瘤抗正丁酸鈉(NaBu)誘導(dǎo)凋亡的功能.第三部分NaBu促進(jìn)H18.D4雜交瘤分泌抗體機(jī)制的研究.利用NaBu促進(jìn)雜交瘤細(xì)胞分泌單克隆抗體,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了研究.第四部分H18.D4雜交瘤細(xì)胞的中試研究.利用5L生物反應(yīng)