淡水絲足魚用于海水魚細(xì)菌分離物毒力分析和疫苗評(píng)價(jià)的初步研究.pdf

1、隨著海水魚類集約化養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，病害日益嚴(yán)重造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，成為生產(chǎn)發(fā)展的主要制約因素，及時(shí)有效地防治疾病危害已成為滿足水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)發(fā)展的迫切要求。簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的病原菌致病性分析和疫苗免疫保護(hù)評(píng)價(jià)模型的構(gòu)建，必將加快魚病診斷和疫苗研制應(yīng)用的工作進(jìn)程。本文對(duì)淡水絲足魚進(jìn)行鹽度馴化，初步探討了絲足魚在海水細(xì)菌致病性分析和疫苗評(píng)價(jià)方面的應(yīng)用。以斑馬魚(Daniorerio)和劍尾魚(Xiphophorushelleri)作比較對(duì)絲足

2、魚耐鹽性進(jìn)行研究，測(cè)定絲足魚的96h半致死鹽度(LS50-96h)、平均成活時(shí)間(MST)、50％成活時(shí)間(MT50)、開始死亡時(shí)間和死亡率等耐鹽指標(biāo)，并逐級(jí)提高養(yǎng)殖水體鹽度對(duì)絲足魚進(jìn)行耐鹽馴化實(shí)驗(yàn)，測(cè)定絲足魚在14鹽度不同馴化時(shí)間的滲透壓。結(jié)果表明：①絲足魚的耐鹽性高于斑馬魚，而低于劍尾魚的耐鹽性；②絲足魚稚、幼魚間耐鹽性存在著極顯著差異，其耐鹽性與日齡有關(guān)，日齡越大，耐鹽性越強(qiáng)；③絲足魚在鹽度14半咸水中馴化48h左右滲透壓基本調(diào)節(jié)

3、平衡。試驗(yàn)結(jié)果說明經(jīng)過從低鹽度到高鹽度的梯度馴化，絲足魚可適應(yīng)鹽度為14的半咸水，這為絲足魚用于海水致病菌毒力分析奠定了理論基礎(chǔ)。 為探討絲足魚分析海水病原菌毒力的可行性，采用注射、創(chuàng)傷和浸浴三種感染方式用鰻弧菌對(duì)鹽度馴化后的絲足魚進(jìn)行人工感染試驗(yàn)，并人工感染大菱鲆作比較，分別測(cè)定半致死濃度、觀察感染絲足魚的血液生理指標(biāo)及組織病理變化。結(jié)果表明，鹽度13～14馴化的絲足魚對(duì)鰻弧菌感染的敏感性明顯高于大菱鲆；與浸浴和創(chuàng)傷感染相比，

4、鰻弧菌的腹腔注射對(duì)絲足魚的感染效果更佳。感染魚的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量和血小板數(shù)均顯著減少，組織病理變化以全身溶血性貧血和廣泛的組織細(xì)胞變性、壞死為主。用從自然發(fā)病的大菱鲆體內(nèi)分離得到的幾株細(xì)菌感染絲足魚，絲足魚感染臨床癥狀明顯，累計(jì)死亡數(shù)根據(jù)接種細(xì)菌量呈梯度變化，半致死濃度LD50比對(duì)大菱鲆LD50略小，表明絲足魚在較高鹽度條件下對(duì)海水病原菌高度敏感。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示鹽度馴化絲足魚在海水細(xì)菌病原致病性分析方面有較好的應(yīng)用前景

5、。 用鰻弧菌滅活疫苗以注射、浸浴和添加莨菪堿浸浴三種方式免疫鹽度馴化的絲足魚，意在探討用絲足魚建立經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)室疫苗免疫評(píng)價(jià)模型。初次免疫50d后同法加強(qiáng)免疫一次，試驗(yàn)期間每隔10天用間接ELISA法檢測(cè)試驗(yàn)魚的特異性免疫應(yīng)答水平，并通過攻毒測(cè)定疫苗的免疫保護(hù)指數(shù)。檢測(cè)結(jié)果表明，3種方式免疫都能刺激絲足魚產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。注射和添加莨菪堿浸浴免疫在第10天即可檢測(cè)到抗體效價(jià)，而直接浸浴免疫在免疫后第20天才檢測(cè)到效價(jià)，抗體

6、產(chǎn)生較晚。各免疫組血清抗體效價(jià)的最高值分別達(dá)到1∶1024、1∶32、1∶128。用鰻弧菌攻毒免疫魚，三個(gè)免疫組的免疫保護(hù)指數(shù)分別為對(duì)照組的2785、36、179倍；免疫組對(duì)哈維氏弧菌感染的免疫保護(hù)指數(shù)分別是19.3、2.3、6.9，表明疫苗對(duì)哈維氏弧菌感染存在一定的交叉保護(hù)作用。免疫組和對(duì)照組的魚體重?zé)o顯著差異，說明疫苗對(duì)生長(zhǎng)無影響。注射免疫是最有效的免疫方式，添加莨菪堿可明顯加強(qiáng)浸浴免疫效果。鰻弧菌滅活疫苗對(duì)鹽度馴化絲足魚和牙鲆或大