小檗堿抑制HCT116細(xì)胞增殖與Wnt-β-catenin信號(hào)的關(guān)系研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　 研究小檗堿抑制結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞增殖與Wnt/β-catenin信號(hào)之間的關(guān)系及可能機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 采用結(jié)晶紫染色、免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、Western blot、報(bào)告質(zhì)粒等技術(shù)，研究小檗堿抑制HCT116細(xì)胞增殖與Wnt/β-catenin信號(hào)之間的關(guān)系及其可能的機(jī)制。具體方法如下:
　　 1.分別采用結(jié)晶紫染色、免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)，檢測(cè)小檗堿對(duì)結(jié)腸

2、癌細(xì)胞HCT116增殖、凋亡和周期的影響。
　　 2.利用熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒，檢測(cè)小檗堿對(duì)HCT116細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。
　　 3.通過(guò)Western blot檢測(cè)，小檗堿對(duì)HCT116細(xì)胞總蛋白和胞漿/核蛋白中β-catenin蛋白水平以及Wnt下游目的基因表達(dá)的影響。
　　 4.利用重組腺病毒技術(shù)，檢測(cè)在過(guò)表達(dá)及沉默表達(dá)β-catenin的情況下，小檗堿對(duì)HCT116細(xì)胞增殖的影響。

3、
　　 5.采用LiCl抑制GSK3β，檢測(cè)小檗堿對(duì)HCT116細(xì)胞增殖及細(xì)胞胞漿/核蛋白中β-catenin水平的影響。
　　 6.采用RT-PCR方法，檢測(cè)小檗堿對(duì)HCT116細(xì)胞β-catenin表達(dá)的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1.小檗堿抑制HCT116細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡，并促使細(xì)胞發(fā)生G1期周期阻滯。
　　 2.小檗堿抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性。
　　

4、 3.小檗堿降低HCT116細(xì)胞總蛋白和胞漿/核蛋白中β-catenin蛋白水平，以及下游目的基因的表達(dá)。
　　 4.外源性過(guò)表達(dá)β-catenin減弱小檗堿對(duì)HCT116增殖的抑制作用，而沉默表達(dá)β-catenin能加強(qiáng)小檗堿對(duì)HCT116增殖的抑制作用。
　　 5.GSK3β抑制劑LiCl不能逆轉(zhuǎn)小檗堿對(duì)HCT116增殖的抑制作用以及胞漿/核蛋白中β-catenin蛋白水平的降低。
　　 6.小檗堿明顯抑制