紅毛五加總苷抗凝作用的研究.pdf

1、紅毛五加(Acanthopanax giraii Harms)作為藥用植物已有悠久的歷史，具有祛風(fēng)除濕、活血化淤的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，紅毛五加皮中含有多糖類、嘌呤類、皂苷類及萜類物質(zhì)，而苷類主要為刺五加苷類，尤以刺五加苷E、B為多。其藥理作用廣泛，已證實(shí)具有抗心律失常、抗缺氧、抗腫瘤、抗炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、鎮(zhèn)痛、抗輻射、抗病毒、保肝等作用。 血栓栓塞性疾病是一類嚴(yán)重危害人類健康和生命的疾病。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為血栓屬于血淤范疇，中

2、醫(yī)的血淤與血小板高聚集狀態(tài)、血液循環(huán)障礙及血栓形成有關(guān)；而活血化淤則與抑制血小板功能、改善血液循環(huán)障礙，防止血栓形成或溶解血栓有著密切的關(guān)系。 本實(shí)驗(yàn)首次選用具有活血化淤功效的紅毛五加醇提物即紅毛五加總苷(Total Glucosides of Acanthopanax Giraldii，TGA)進(jìn)行抗凝作用的初步研究，以期望研制一種天然、安全、適用范圍廣的新型抗凝藥物，指導(dǎo)臨床預(yù)防及治療血栓性疾病。 實(shí)驗(yàn)分兩部分

3、 目的：從紅毛五加莖皮中提取TGA并控制其質(zhì)量方法： 第一部分紅毛五加總苷的提取及其質(zhì)量控制 1.將紅毛五加藥材粉碎，經(jīng)乙醇浸泡，減壓蒸-T濾液，氯化鈉溶解、正丁醇萃取、正丁醇相減壓蒸干、真空干燥等步驟得到浸膏樣物質(zhì)。 2.高效液相分析以乙腈-水(19：81)為流動(dòng)相，以Diamonsil C<,18>柱(5μm4.6mm×250mm)為固定相，檢測波長為220 nm，柱溫22℃。 3.以刺五加苷E作為

4、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，測定不同提取條件所得TGA中刺五加苷E含量，優(yōu)化提取過程。 結(jié)果： 1.經(jīng)Molish反應(yīng)和Libatman反應(yīng)鑒定，確認(rèn)提取物為總苷。 2.刺五加苷E線性范圍為2.0～40.0 μg/ml，平均回收率為100.13﹪，RSD﹪為0.34﹪。 結(jié)論： 1.紅毛五加總苷提取率為0.17﹪，TGA中刺五加苷E含量為4.67﹪。 2.方法可靠，簡單可行，為控制TGA的內(nèi)在質(zhì)量提供了

5、科學(xué)依據(jù)。 第二部分紅毛五加總苷抗凝作用的研究 目的：研究TGA對大鼠、小鼠血小板聚集功能、凝血時(shí)間，大鼠凝血活性的影響及TGA對小鼠血小板聚集、凝血時(shí)間影響的時(shí)效關(guān)系。 方法： 1.體外作用研究：將不同濃度(終濃度分別為10 mg/L，20 mg/L，100 mg/L)的TGA與SD大鼠全血孵育，加入花生四烯酸、腎上腺素和二磷酸腺苷，觀察TGA對血小板聚集的影響。 2.體內(nèi)作用研究： 2

6、.1.TGA200，100，50 mg/kg·d×7 d灌胃給藥后，分別檢測由花生四烯酸、腎上腺素和二磷酸腺苷誘導(dǎo)的SD大鼠、昆明種小鼠全血血小板聚集。 2.2.TGA 200，100，50 mg/kg·d×7 d灌胃給藥后，檢測SD大鼠的凝血活性(凝血酶原時(shí)間、活化部分凝血活酶時(shí)間、凝血酶時(shí)間和纖維蛋白原含量)。 2.3.TGA 200，100，50 mg/kg·d×7 d灌胃給藥后，分別檢測SD大鼠及昆明種小鼠的凝血

7、時(shí)間。 2.4.TGA 100 mg/kg灌胃給予昆明種小鼠，分別與用藥后0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，4，6，8，12 h檢測凝血時(shí)間及花生四烯酸誘導(dǎo)的全血血小板聚集阻抗值。 結(jié)果： 1.TGA 10 mg/L，20 mg/L，100 mg/L對SD大鼠體外分別由AA，腎上腺素，ADP誘導(dǎo)的全血血小板聚集有抑制作用，且隨劑量增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)。 2.TGA 200，100，50 mg/kg

8、·d ×7d灌胃給藥，對SD大鼠和昆明種小鼠分別由AA，腎上腺素，ADP誘導(dǎo)的全血血小板聚集有抑制作用，且隨劑量增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)。 3.TGA 200，100，50 mg/kg·d×7d灌胃給藥，可明顯延長SD大鼠凝血酶原時(shí)間，活化部分凝血酶時(shí)間及凝血酶時(shí)間，減少纖維蛋白原含量，且隨劑量增加，作用逐漸增強(qiáng)。 4.TGA 200，100，50 mg/kg·d×7d灌胃給藥，均明顯延長SD大鼠與昆明種小鼠的凝血時(shí)間，且

9、隨劑量增加，延長作用更加明顯。 5.TGA 100 mg/kg灌胃給藥后1.5 h小鼠凝血時(shí)間明顯延長，可維持約2.5h；給藥后1h即可對花牛四烯酸誘導(dǎo)的全血血小板聚集出現(xiàn)抑制作用，可維持約11h。 結(jié)論： 1.TGA體內(nèi)外用藥均可通過抑制血小板聚集而達(dá)到抗凝作用；其抑制作用廣譜，對花生四烯酸、腎上腺素、二磷酸腺苷三條誘導(dǎo)途徑均有作用。 2.TGA體內(nèi)用藥可明顯延長大鼠凝血酶原時(shí)間，活化部分凝血酶時(shí)間及凝