2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)在硫化氫(H2S)調(diào)節(jié)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡中的作用;初步研究外源性H2S調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)肝細(xì)胞ERS的分子機(jī)制。
  方法:大鼠肝細(xì)胞系BRL細(xì)胞培養(yǎng),用LPS、ERS誘導(dǎo)劑毒胡蘿卜素(TG)、ERS抑制劑4-苯基丁酸(4-PBA)分別或組合處理BRL細(xì)胞;用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)沉默H2S生成酶胱硫醚-β-合酶(CBS)及胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)表達(dá),H2S供體硫氫化鈉(NaHS

2、)與LPS共同處理肝細(xì)胞;分別用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)、KATP通道抑制劑格列苯脲(Gli)預(yù)處理細(xì)胞,再觀察NaHS與LPS的作用。用去蛋白法檢測(cè)細(xì)胞 H2S含量;用MTT比色法或臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)細(xì)胞活力;用Hoechst33258熒光染色確證細(xì)胞凋亡;用Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;用Western blot檢測(cè) ERS標(biāo)志蛋白 GRP78和 ERS凋亡相關(guān)蛋白CHOP、caspase-

3、12和caspase-3蛋白表達(dá)。
  結(jié)果:與溶劑對(duì)照組比較,LPS可劑量和時(shí)間依賴(lài)性引起肝細(xì)胞活力顯著降低、細(xì)胞凋亡率明顯增加,誘導(dǎo)GRP78以及CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào);TG本身可引起肝細(xì)胞活力降低和細(xì)胞凋亡增加,能顯著加重LPS引起的肝細(xì)胞損傷;4-PBA可起細(xì)胞凋亡少量但明顯增加,明顯抑制了LPS引起的肝細(xì)胞凋亡增加;CBS siRNA、CSE siRNA能顯著抑制靜息肝細(xì)胞和LPS

4、引起肝細(xì)胞內(nèi)源性H2S生成,并抑制LPS引起肝細(xì)胞活力降低、細(xì)胞凋亡增加,翻轉(zhuǎn)了LPS引起GRP78和CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào);NAC預(yù)處理能明顯降低 LPS引起的細(xì)胞活力降低、凋亡增加以及 GRP78和 CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào),與NaHS共同作用具有協(xié)同效應(yīng);Gli預(yù)處理能明顯促進(jìn)LPS引起的細(xì)胞活力降低、凋亡增加以及GRP78和CHOP、caspase-1

5、2和caspase-3蛋白表達(dá)上調(diào),部分阻斷NaHS對(duì)LPS引起ERS的拮抗作用。
  結(jié)論:LPS通過(guò)引起氧化應(yīng)激而誘導(dǎo)肝細(xì)胞ERS,ERS參與介導(dǎo)LPS誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡;在本實(shí)驗(yàn)條件下,內(nèi)源性H2S上調(diào)、外源性H2S抑制LPS引起的肝細(xì)胞ERS,從而調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡變化;外源性H2S通過(guò)增強(qiáng)抗氧化效應(yīng)、開(kāi)放KATP通道抑制LPS引起的ERS上調(diào),從而減少了LPS誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡增加;內(nèi)、外源性H2S對(duì)LPS誘導(dǎo)肝細(xì)胞

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