人涎腺多形性腺瘤細胞的體外培養(yǎng)及其生物學特性.pdf

1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文人涎腺多形性腺瘤細胞的體外培養(yǎng)及其生物學特性姓名：張秀琴申請學位級別：碩士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：王潔2003.3.1中文摘要加少量培養(yǎng)液，剛沒過組織塊，靜止培養(yǎng)。3天后，第一次觀察，以后每天觀察一次，以后視PH值變化加或更換新鮮培養(yǎng)液。第4天，觀察有個別成纖維細胞游出，培養(yǎng)第7天，倒置顯微鏡下見部分組織塊周圍長出細胞暈，細胞呈上皮樣鑲嵌排列，少數(shù)細胞呈分散生長狀態(tài)。每3天換一次液，第17天，第一次傳代。用0

2、25％胰酶和002％EDTA(1：1)消化細胞。對成纖維細胞采取了消化的方法，經(jīng)2～3次傳代后獲得較為純凈的腫瘤細胞，現(xiàn)在已經(jīng)連續(xù)傳代12次以上，建立了有限細胞系，命名為SPA02。結(jié)果：1生長情況：SPA腫瘤細胞原代培養(yǎng)時，細胞從組織塊周圍游出，形成“細胞暈”，隨著細胞的分裂、增殖，細胞暈逐漸擴大，最后連接成片。可見有重疊生長現(xiàn)象。傳代后細胞有的呈單個分散狀態(tài)，也有的呈團塊存在。貼壁后，經(jīng)過一段時間的適應期，細胞開始分裂、增殖，隨著細

3、胞的增殖先形成小片狀，然后連成一大片。早期，每瓶擴傳兩瓶時，一般在7天左右即可基本鋪滿瓶底。有關(guān)的觀察指標如下：(1)生長曲線：取第5代細胞制成細胞懸液，接種于小方瓶內(nèi)，隔日換液，每日取三瓶計數(shù)，連續(xù)八天，制成曲線。傳代后，因第l、2天細胞未貼壁曲線有所下降，第3天呈現(xiàn)上升趨勢，第5、6天達高峰。(2)凍存及復蘇后的生長情況：取第7代細胞，用10％的二甲基亞楓作保護劑，貯存于液氮中。于2個月后，取一支復蘇，細胞生長狀態(tài)良好。2形態(tài)學觀察