紅豆杉細(xì)胞對(duì)紫杉醇防御響應(yīng)的機(jī)理研究.pdf

1、為了研究紅豆杉細(xì)胞對(duì)紫杉醇(taxo1)防御反應(yīng)的機(jī)制,以人工半合成的taxol類似物多烯紫杉醇(taxotere)代替taxol,建立了taxol誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系,結(jié)果表明taxol作為類誘導(dǎo)子激活了紅豆杉細(xì)胞防御響應(yīng).通過研究不同濃度的DMSO和乙醇對(duì)東北紅豆杉細(xì)胞代謝和細(xì)胞膜通透性的影響,發(fā)現(xiàn)一定劑量的DMSO和乙醇抑制了細(xì)胞的生長、降低了細(xì)胞活力、增大了細(xì)胞膜的通透性.在相同濃度的條件下,DMSO比乙醇對(duì)細(xì)胞的毒性小,

2、低于1％(v/v)的添加量,DMSO不影響細(xì)胞代謝和膜的通透性,而只是短時(shí)改變了酶的活力,而同樣濃度的乙醇則會(huì)嚴(yán)重干擾細(xì)胞的代謝,破壞細(xì)胞膜的完整性.系統(tǒng)研究了taxol和taxotere對(duì)不同生長時(shí)期紅豆杉細(xì)胞代謝的影響.發(fā)現(xiàn)在對(duì)數(shù)前期加入taxol和taxotere,可顯著抑制細(xì)胞的繁殖;而在對(duì)數(shù)生長后期加入taxol和taxotere,對(duì)細(xì)胞的增殖無顯著影響,說明taxol及taxotere對(duì)不同生長時(shí)期紅豆杉細(xì)胞的作用機(jī)制不同.

3、系統(tǒng)研究了taxol和taxotere誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)體系的防御響應(yīng)機(jī)制.適當(dāng)濃度的taxol(10μM)和taxotere(35 μM)可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生防御響應(yīng),包括明顯的H+跨膜內(nèi)流和活性氧積累的早期防御響應(yīng)以及隨后活化PAL和促進(jìn)taxol合成的晚期防御響應(yīng).采用二維凝膠電泳技術(shù),分析了taxol誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生早期防御響應(yīng)的蛋白表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)taxol誘導(dǎo)了10個(gè)新蛋白點(diǎn)的表達(dá),其中一些新蛋白點(diǎn)的分子量與細(xì)胞信號(hào)分子G-蛋白、Ca<

4、'2+>依賴蛋白激酶的分子量接近.應(yīng)用NADPH特異性抑制劑研究發(fā)現(xiàn)NADPH氧化酶激活是外源taxol和taxotere誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生活性氧產(chǎn)生的主要機(jī)制,H<,2>O<,2>是活性氧積累的主要成分.系統(tǒng)分析了taxol和taxotere在有、無細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中,濃度的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律和考察了通過改變細(xì)胞膜通透性taxol的釋放的機(jī)制,結(jié)果顯示胞內(nèi)taxol的釋放存在逆濃度的過程,膜通透性的增大在一定程度上促進(jìn)了taxol釋放,但并不是主要機(jī)