南方紅豆杉組織培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇研究.pdf

1、紫杉醇是療效確切的抗癌新藥，但其天然來(lái)源——紅豆杉物種稀少，瀕臨滅絕。本研究通過(guò)對(duì)南方紅豆杉進(jìn)行組織培養(yǎng)，優(yōu)化各種培養(yǎng)條件，進(jìn)一步提高紫杉醇含量，為保護(hù)紅豆杉資源和擴(kuò)大紫杉醇的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)性資料。本試驗(yàn)取得了以下結(jié)果： 1.南方紅豆杉外植體最佳消毒方案：在單因素預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，篩選出用于南方紅豆杉組織培養(yǎng)的最佳外植體為當(dāng)年生嫩莖，并首次采用正交設(shè)計(jì)，確定出最適消毒方案為先使用70％的酒精浸泡30s，再使用0.2％的升汞浸泡8

2、min。 2.南方紅豆杉愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的優(yōu)化：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在單因素預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)三種激素的濃度進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，確定出用于誘導(dǎo)南方紅豆杉愈傷組織的最適激素配比為，NAA濃度1.5mg/L，6-BA濃度0.1mg/L，2，4-D濃度0.25mg/L。 3.南方紅豆杉愈傷組織生產(chǎn)培養(yǎng)基的優(yōu)化：以B5培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，在單因素預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)三種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的濃度進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，確定出適于南方紅豆杉愈傷組織

3、傳代培養(yǎng)的生產(chǎn)培養(yǎng)基生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)添加方案為，NAA濃度0.5mg/L，6-BA濃度0.5mg/L，水解酪蛋白濃度1.0g/L。 4.南方紅豆杉愈傷組織抗褐變劑篩選：根據(jù)多酚氧化酶(PPO)在南方紅豆杉愈傷組織褐變中的核心作用，選擇出可以從不同方面對(duì)PPO進(jìn)行抑制的三種抗褐變物質(zhì)，在單因素預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，首次對(duì)抗褐變劑進(jìn)行組合使用，采取正交設(shè)計(jì)確定出抗褐變劑添加方案為PA濃度100mg/L，AC濃度500mg/L，水解酪蛋白濃度6