余甘子葉抗癌化學(xué)成分誘導(dǎo)人肝癌細胞株凋亡及機制研究.pdf

1、目的：通過對余甘子葉抗癌化學(xué)成分沒食子酸、沒食子酸乙酯及沒食子酸、沒食子酸乙酯混合物誘導(dǎo)人肝癌細胞株 BEL-7404凋亡和相關(guān)凋亡基因蛋白Bax與Bcl-2表達的研究，探討余甘子葉抗癌化學(xué)成分誘導(dǎo)人肝癌細胞株BEL-7404凋亡的分子機制。
　　方法：采用MTT法和細胞集落形成法體外測定余甘子葉抗癌化學(xué)成分對人肝癌細胞株 BEL-7404增殖的影響；普通光學(xué)顯微鏡、倒臵顯微鏡和熒光顯微鏡觀察余甘子葉抗癌化學(xué)成分作用人肝癌細胞株B

2、EL-7404后的形態(tài)學(xué)變化；AnnexinV/PI雙標記法流式細胞術(shù)檢測誘導(dǎo)人肝癌細胞株 BEL-7404早期凋亡的情況；原位末端標記法檢測誘導(dǎo)人肝癌細胞株 BEL-7404的晚期凋亡情況及其凋亡抑制率；PI和Hoechst33342雙染色法流式檢測對人肝癌細胞株 BEL-7404各周期的影響；細胞熒光免疫染色法和免疫印記法檢測Bax和Bcl-2蛋白表達變化。
　　結(jié)果：余甘子葉抗癌化學(xué)成分不同程度的抑制人肝癌細胞株BEL-74

3、04的增殖，并呈時間和濃度依賴性。三種不同顯微鏡均可觀察到余甘子葉抗癌化學(xué)成分作用人肝癌細胞株 BEL-7404后發(fā)生的形態(tài)學(xué)改變，并出現(xiàn)典型的凋亡特征。AnnexinV/PI雙標記法檢測顯示人肝癌細胞株BEL-7404早期凋亡細胞數(shù)隨作用時間的延長而增加。Tunel法檢測晚期凋亡情況，其凋亡率亦隨作用時間的延長而增大。PI和Hoechst33342雙染色法分析結(jié)果顯示，G0/G1和G2/M期細胞數(shù)增多，S期減少，呈現(xiàn)細胞阻滯現(xiàn)象，并伴

4、有大量的細胞凋亡。熒光免疫染色顯示，藥物作用人肝癌細胞株BEL-740472h后Bax蛋白表達升高，Bcl-2蛋白表達則降低。免疫印跡法進一步驗證了熒光免疫染色的結(jié)果。
　　結(jié)論：余甘子葉抗癌化學(xué)成分能抑制人肝癌細胞株BEL-7404的增殖并誘導(dǎo)其產(chǎn)生凋亡，阻滯G0/G1，G2/M期細胞，并通過上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl-2蛋白表達，導(dǎo)致線立體膜電位的下降，進而激活Caspase，最終導(dǎo)致細胞死亡，可能是其誘導(dǎo)人肝癌細胞株 BEL-7