姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞株的誘導(dǎo)分化作用.pdf

1、目的：惡性腫瘤是一種細(xì)胞分化障礙性疾病，其核心問題是正常細(xì)胞的分化受阻。大量實(shí)驗(yàn)表明，腫瘤起源于一些未分化或微分化的干細(xì)胞，是由于組織更新時(shí)所產(chǎn)生的分化異常。惡性腫瘤細(xì)胞喪失了正常分化的能力，表現(xiàn)為分化障礙和失控性增長(zhǎng)，但仍具有和正常細(xì)胞相同的分化潛能。因此，利用分化誘導(dǎo)劑促使腫瘤細(xì)胞部分或者全部恢復(fù)分化潛能，轉(zhuǎn)變?yōu)檎＜?xì)胞的研究，成為抗腫瘤研究的新熱點(diǎn)。肝癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，最近國(guó)內(nèi)外研究表明，許多分化誘導(dǎo)劑能促進(jìn)肝癌細(xì)胞

2、分化。姜黃素（curcumin）是一種酚性色素，近年來(lái)眾多研究發(fā)現(xiàn)姜黃素具有抗腫瘤作用，其機(jī)制尚未明確，但目前普遍認(rèn)為可能主要具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等機(jī)制，從而達(dá)到抗腫瘤的作用。本課題通過應(yīng)用姜黃素作用于人肝癌細(xì)胞株BEL-7402，探討姜黃素對(duì)肝癌細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用，從而為姜黃素治療肝癌提供理論依據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402，經(jīng)不同濃度姜黃素處理人肝癌

3、細(xì)胞株后，用倒置顯微鏡觀察人肝癌細(xì)胞株BEL-7402形態(tài)的改變；應(yīng)用酶促反應(yīng)方法測(cè)定細(xì)胞漿γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）活性，用免疫組化染色檢測(cè)細(xì)胞漿中甲胎蛋白（AFP）合成情況，放免法測(cè)定細(xì)胞AFP和白蛋白（ALB）分泌量，觀察細(xì)胞分化過程中分化功能的改變；用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定用藥后細(xì)胞周期的變化。觀察姜黃素對(duì)以上指標(biāo)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 ①姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402在形態(tài)上的影響：姜黃素作用后細(xì)胞形態(tài)向

4、成熟正常分化方向變化。
　　 ②姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402 γ-GT活性的影響：在培養(yǎng)過程中各姜黃素處理組γ-GT比活力逐漸下降，從第2天開始顯著下降，自第3～5天開始下降緩慢，各實(shí)驗(yàn)組較同期培養(yǎng)的對(duì)照組細(xì)胞顯著性降低（p<0.01）。而姜黃素10μmol/L、20μmmol/L實(shí)驗(yàn)組之間無(wú)顯著性差異。
　　 ③姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402內(nèi)AFP的影響：實(shí)驗(yàn)觀察2天，細(xì)胞免疫組化結(jié)果顯示，對(duì)照組細(xì)胞A

5、FP表達(dá)較強(qiáng)，著色較深，呈棕黃色，主要成團(tuán)濃集分布于胞漿中，實(shí)驗(yàn)組.AFP表達(dá)明顯減弱，在胞漿內(nèi)均勻分布，著色較淡，呈黃色。隨著用藥濃度的增加而著色是越來(lái)越淡。配合真彩色圖像分析，每對(duì)照組和10μmmol/L、20μmmol/L實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞AFP的每個(gè)細(xì)胞陽(yáng)性色的光密度值分別為253.5、220.9、189.5。
　　 ④姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402AFP分泌量的影響：各姜黃素處理組AFP分泌量均在第2天開始就顯著下降，隨

6、著作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降，第5天降至最低。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞AFP分泌量較同天培養(yǎng)的對(duì)照組細(xì)胞顯著性降低（p<0.01）。而20μmmol/L 組較10μmmol/L組AFP分泌量更低（p<0.01）。
　　 ⑤姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402ALB分泌量的影響：各姜黃素處理組ALB分泌量自第2天開始明顯升高，自第5天開始有小幅度下降，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞ALB分泌量較培養(yǎng)天數(shù)相同的對(duì)照組細(xì)胞顯著性升高（p<0.01）。而20μmmol/L組

7、較10μmmol/L組ALB分泌量明顯增高（p<0.01）。
　　 ⑥姜黃素對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL-7402細(xì)胞周期的影響：姜黃素作用后，隨著姜黃素濃度增加，人肝癌細(xì)胞株BEL-7402 G1/G0期比例逐步增高，由57.3％上升到69.8％，處于S期細(xì)胞比例逐漸減少，由29.7％下降至16.4％，說(shuō)明姜黃素將人肝癌細(xì)胞株BEL-7402阻滯在G1期。
　　 結(jié)論：姜黃素能使人肝癌細(xì)胞株BEL-7.402形態(tài)趨于成熟分化，