CXCR4及FOXP3在神經母細胞瘤細胞上的表達及其對化療敏感性的研究.pdf

1、[背景與目的]趨化因子是一類能夠引起白細胞直接遷移的細胞因子，趨化因子及其受體之間形成一種復雜的趨化因子網絡，影響腫瘤細胞的生長、存活、遷移、血管形成以及腫瘤部位的白細胞浸潤。CXCR4是最常見的一種高表達于不同類型惡性腫瘤細胞上的趨化因子受體。CXCR4與其配體CXCL12(又名SDF-1)結合，構成SDF-1/CXCR4生物學軸，廣泛參與腫瘤的趨向性侵襲、轉移及預后。
　　 神經母細胞瘤是兒童最常見的顱外惡性實體瘤，其惡性程

2、度高，可發(fā)生早期多處轉移，研究提示趨化因子受體CXCR4在神經母細胞瘤細胞表面的表達異常是導致腫瘤轉移浸潤的重要因素。
　　 除了趨化因子受體的異常表達外，腫瘤細胞對體內免疫監(jiān)視系統(tǒng)的逃逸也是其發(fā)生、發(fā)展及轉移的重要機制之一。眾多研究表明，F(xiàn)oxp3，一種抑制機體免疫應答的轉錄因子，廣泛參與了腫瘤細胞的免疫逃避過程。深入探討Foxp3在腫瘤組織中的表達及其意義也是本領域研究的熱點之一。
　　 基于以上資料，為了深入認識神

3、經母細胞瘤的生物學規(guī)律，本研究以LA-N-5及SK-N-SH細胞為研究對象，探討CXCR4及Foxp3在上述兩種神經母細胞瘤細胞中的表達及其化療藥物CTX，THP對其的影響，明確化療藥物是否能通過抑制轉移相關趨化因子受體，或通過抑制Foxp3的表達發(fā)揮作用。
　　 [材料與方法]體外培養(yǎng)神經母細胞瘤細胞系LA-N-5及SK-N-SH；常規(guī)流式細胞術(FACS)方法測定CXCR4在上述兩種細胞中的表達；用細胞內染色的方法檢測Fox

4、p3在上述兩種細胞中的表達；MTT試驗明確化療藥物CTX，THP對兩種細胞的效應劑量；最后通過實時定量PCR方法(Real-time PCR)，在基因水平檢測化療藥物對上述腫瘤細胞中CXCR4及腫瘤耐受相關分子Foxp3表達的變化。
　　 [結果]
　　 1.FACS結果顯示LA-N-5及SK-N-SH兩種神經母細胞瘤細胞均高表達CXCR4分子(圖1)。
　　 2.FACS結果顯示，化療藥物CTX，THP顯著降低

5、了LA-N-5細胞上CXCR4的表達，加藥組細胞CXCR4的平均熒光強度顯著低于未加藥對照組(p<0.05)(圖3A)。而化療藥物CTX，THP以及二者聯(lián)合的情況下，均未顯著影響神經母細胞瘤SK-N-SH上CXCR4的表達(p>0.05)(圖3B)。
　　 3.Real-time PCR結果顯示化療藥物CTX本身未表現(xiàn)出降低CXCR4表達的效果，而THP或THP與CTX合用的情況下顯著降低了LA-N-5細胞中CXCR4的表達，(

6、P<0.01)。
　　 4.FACS結果顯示LA-N-5，SK-N-SH兩種神經母細胞瘤內均高表達Foxp3分子(圖2-1)。
　　 5.化療藥物CTX，THP顯著降低了LA-N-5上Foxp3分子的平均熒光強度(P<0.05)，而上述化療藥物對SK-N-SH細胞內Foxp3分子的熒光強度沒有顯著的影響(圖2-2)。
　　 6.Real-time PCR結果顯示CTX顯著降低了Foxp3在LA-N-5細胞中的表達