丹參素與羥基紅花黃素A合用對大鼠腦缺血再灌注損傷的協(xié)同作用及機制研究.pdf

1、目的：腦缺血再灌注損傷涉及一系列錯綜復(fù)雜的損傷級聯(lián)反應(yīng)，因此，僅使用一種腦保護藥物很難阻斷損傷級聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生，藥物的聯(lián)合應(yīng)用可能會成為治療缺血性腦血管病的新方向。本研究通過觀察丹參素與羥基紅花黃素A合用對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能學(xué)評分、腦梗死體積及腦組織病理形態(tài)學(xué)變化的影響，初步評價兩藥合用的協(xié)同保護作用。實驗進一步觀察兩藥合用對腦缺血再灌注損傷大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細胞凋亡百分率及凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax、Caspase-3

2、mRNA和蛋白表達的影響，深入研究兩藥合用對腦缺血產(chǎn)生協(xié)同保護作用的機制。 方法取健康雄性Wistar大鼠200只，隨機分為8組：假手術(shù)組，缺血再灌注損傷組(IR)，丹參素組(24 mg·kg<'-1>)，羥基紅花黃素A組(20 mg·kg<'-1>)，丹參素+羥基紅花黃素A低劑量組(6 mg·kg<'-1>+5 mg·kg<'-1>)，丹參素+羥基紅花黃素A中劑量組(12 mg·kg<'-1>+10 mg·kg<'-1>)

3、，丹參素+羥基紅花黃素A高劑量組(24 mg·kg<'-1>+20 mg-kg<'-1>)。采用改良的Zea Longa's大腦中動脈內(nèi)栓線阻斷法(MCAO)制備可逆性大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，并于缺血1 h后實現(xiàn)再灌注。各組分別于腦缺血時和再灌注時靜脈注射1/2相應(yīng)藥物劑量。腦缺血1 h再灌注24 h后，每組取其中8只動物行神經(jīng)病學(xué)檢查，繼而斷頭取腦經(jīng)TTC染色后測定缺血側(cè)腦組織梗死體積，將腦片固定于4％多聚甲醛磷酸緩沖液內(nèi)，2

4、4～48 h后行HE染色；6只動物利用流式細胞術(shù)測定細胞凋亡百分率；5只動物取大鼠海馬組織利用RT-PCR技術(shù)分析藥物對bcl-2、bax和Caspase-3 mRNA表達的影響；6只動物灌流固定后利用免疫組化方法分析藥物對大鼠海馬CAl區(qū)bcl-2、bax和Caspase-3蛋白表達的影響。 結(jié)果：與假手術(shù)組相比，缺血再灌注損傷組大鼠神經(jīng)功能缺損體征明顯，缺血側(cè)腦組織出現(xiàn)明顯的梗死灶，HE染色病理學(xué)檢查顯示重度缺血損傷改變，神

5、經(jīng)細胞凋亡百分率明顯升高，海馬區(qū)bcl-2、bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表達均有不同程度的升高。與缺血再灌注損傷組相比，各用藥組均可改善腦缺血損傷：腦梗死體積縮小，大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀和缺血側(cè)腦組織病理形態(tài)學(xué)得到不同程度的改善。兩藥合用可明顯降低缺血腦組織神經(jīng)細胞凋亡百分率，增加bcl-2 mRNA和蛋白的表達，降低bax、Caspase-3 mRNA和蛋白的表達。兩藥合用與單藥治療相比改善腦缺血損傷的效果更加顯著。