RNAi對晶體上皮細胞炎癥損傷模型中IKK-α及下游因子的抑制作用的研究.pdf

1、青島大學碩士學位論文RNAi對晶體上皮細胞炎癥損傷模型中IKKα及下游因子的抑制作用的研究姓名：張晶申請學位級別：碩士專業(yè)：眼科學指導教師：趙桂秋20080601增加。在轉染混合物的組成為lOnMSiRNA與3OIl1HiPerFect2000時轉染效率最高達706％，并且仍能保證80％的細胞存活率。3實時熒光定量PCR證實：設計并體外轉錄合成的3條IKKasiRNA轉染HLE—B3細胞后，有2條能夠使細胞IKK—QmRNA的表達明顯減

2、少，并且其中l(wèi)條的抑制作用可以達到82％。4定量PCR結果顯示：與『F常組比較，轉染24h后(即加入TNF—Q前)，siRNA組與TNFsiRNA組IKK—QmRNA的表達明顯減少，加入TNFQ后TNF組IKKQmRNA明顯增加，TNFsiRNA組雖有增加但仍低于正常細胞水平。雙抗體夾心法El。ISA結果顯示：各實驗組的細胞培養(yǎng)液中IKKQ蛋白、IL1B、TGF6的含量變化規(guī)律與IKKQmRNA的變化規(guī)律相一致。結論：1應用rhTNFa

3、進行刺激是建立HLE—B3細胞炎癥損傷模型的有效方法。2HLEB3細胞炎癥損傷模型中IKKQ被活化并表達增加，且該因子于胞漿、胞核中表達均呈陽性，IKKQ可能是外傷障中開啟炎癥損傷的關鍵因子。3經(jīng)過轉染條件的優(yōu)化，轉染試劑HiperFect2000能將siRNA高效的轉染進HLE—B3細胞。4自行設計合成的IKKasiRNA轉染進細胞后可以有效地實現(xiàn)對相應的內(nèi)源性RNA的降解。5利用RNA干擾(RNAi)的方法可以有效的抑制TNFQ誘導