同型半胱氨酸致多巴胺能神經(jīng)元模型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激途徑介導Hcy致多巴胺能神經(jīng)元凋亡。 目的: 研究同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)能否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（endoplasmic reticulum stress，ERS）的途徑誘導體外多巴胺能神經(jīng)元模型凋亡。 方法: 不同終濃度的同型半胱氨酸（0、0.1、0.5，1.0、5.0和10 mmol/L）作用于經(jīng)神經(jīng)生長因子（nerve growth factor，

2、NGF）誘導的PC12細胞24h，并選5mmol/L終濃度的同型半胱氨酸在不同時間點（0h、6h、12h、24h和48h）作用于PC12細胞，用四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT）檢測細胞活性；流式細胞儀（Flow Cytometer）檢測細胞凋亡率；半定量RT-PCR分析Caspase-12mRNA的表達。 結(jié)果：PC12細胞經(jīng)過Hcy處理后發(fā)生凋亡。在0～24h期間，24h凋亡率呈濃度依賴性增高。經(jīng)5mmol/L同型半胱氨酸處理的

3、PC12細胞，活力呈時間依賴性下降。隨PC12細胞凋亡率增高及活力的下降，Caspase-12表達同步增加。 結(jié)論：同型半胱氨酸可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡信號途徑誘導體外多巴胺能神經(jīng)元凋亡。 第二部分、同型半胱氨酸誘導PC12細胞凋亡的分子機制研究 目的:研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關凋亡通路IRE-1/TRAF-2信號轉(zhuǎn)導途徑在Hcy誘導PC12細胞凋亡中的作用。 方法: 不同終濃度的同型半胱氨酸（0、0.1、0.5，1.

4、0、5.0和10 mmol/L）作用于經(jīng)神經(jīng)生長因子誘導的PC12細胞24h，選5mmol/L終濃度的同型半胱氨酸在不同時間點（0h、6h、12h、24h和48h）作用于PC12細胞，半定量RT-PCR方法觀測IRE-1和TRAF-2表達的變化，并分析其與細胞凋亡的關系。 結(jié)果：PC12細胞經(jīng)過Hcy處理后發(fā)生凋亡，隨細胞凋亡率的增高IRE-1和TRAF-2的表達亦相應增加。 結(jié)論：同型半胱氨酸誘導體外多巴胺能神經(jīng)元凋亡