F2代抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬的抗病力分析.pdf

1、豬圓環(huán)病毒（PCV）在分類學(xué)上為圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最小動(dòng)物病毒之一。它含有共價(jià)閉合的單股環(huán)狀負(fù)鏈 DNA，基因組大小約為1.76Kb。已知的PCV共有兩個(gè)血清型，即PCV1和PCV2，PCV1為非致病性病毒；PCV2為多種豬常見(jiàn)疾病的病原，感染后導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制，與其它病原體一起引起混合感染或繼發(fā)感染，另外該病毒的感染具有持續(xù)性長(zhǎng)的特點(diǎn)，使疾病長(zhǎng)期存在難以根除，給養(yǎng)豬業(yè)造成極大的損失。目前對(duì)于該病毒的控制主要以注射P

2、CV2疫苗和加強(qiáng)生產(chǎn)管理為主。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，借助新的分子育種技術(shù)獲得抗PCV2豬已成為可能。本實(shí)驗(yàn)室利用RNA干擾技術(shù)（RNAi）結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)成功培育出F0代抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬，并且在分子水平和細(xì)胞水平驗(yàn)證了其抗病性。本研究以F1代轉(zhuǎn)基因公豬與野生型母豬雜交獲得的F2代抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬為對(duì)象，分別從DNA水平、RNA水平及活體水平對(duì)其遺傳表達(dá)穩(wěn)定性、抗PCV2感染效果進(jìn)行檢測(cè)與分析，以獲得安全、有效的抗PCV2轉(zhuǎn)基因豬新

3、品種。主要結(jié)果如下：
　　（1）經(jīng)生物熒光燈、PCR檢測(cè)，出生的37頭F2代豬中有26頭轉(zhuǎn)基因豬，陽(yáng)性率達(dá)70.2％，外源基因能夠穩(wěn)定遺傳。
　?。?）siRNA在轉(zhuǎn)基因豬體內(nèi)能夠表達(dá)，不同個(gè)體同一組織的siRNA表達(dá)量存在顯著差異。
　?。?）利用PCV2加免疫刺激物的方式對(duì)仔豬攻毒可引起PMWS癥狀，血清病毒數(shù)較低時(shí)，轉(zhuǎn)基因豬具有一定的抗病毒效果。
　　（4）攻毒后，四組抗體水平都先下降后回升。A組(轉(zhuǎn)基因直

4、接感染組)和C組（轉(zhuǎn)基因接觸組）的回升速度分別快于B組（野生型直接感染組）和D組（野生型接觸組），且在第56天C組抗體水平顯著高于D組。
　?。?）血常規(guī)結(jié)果顯示，A組和B組、C組和D組各個(gè)時(shí)期各項(xiàng)血液指標(biāo)都沒(méi)有顯著性差異。該結(jié)果說(shuō)明，轉(zhuǎn)基因豬和野生型豬機(jī)體的新陳代謝和功能調(diào)節(jié)基本保持一致。
　　（6）攻毒期間豬只各個(gè)時(shí)期的體重結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因豬和野生型體重沒(méi)有差異。
　?。?）攻毒后采集仔豬組織器官進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)的