呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎與TLR4-NF-κB信號(hào)通路關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的：
　　本研究擬用呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染誘發(fā)SD大鼠引起肺炎，觀察SD大鼠肺組織病理變化，檢測(cè)TLR4通路相關(guān)因子的表達(dá)情況，初步探討其與TLR4-NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系。
　　方法：
　　60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為四組：對(duì)照組、RSV組、Kp組及 RSV+Kp組，每組各15只。通過滴鼻感染法處理各組SD大鼠，于第0、1、3、5、7 d相同時(shí)間段測(cè)量其體重、肺指數(shù)（LI），H&E染色觀察肺部病理變

2、化，RT-PCR檢測(cè)TLR4及NF-κB的mRNA表達(dá)情況，Western blot檢測(cè)NF-κB蛋白質(zhì)的表達(dá)豐度，ELISA檢測(cè)肺泡灌洗液中TNF-α和IL-1β炎性因子的分泌量。
　　結(jié)果：
　　（1）肺指數(shù)：與正常對(duì)照組相比，RSV組、Kp組和RSV+Kp組SD大鼠LI呈逐漸遞增趨勢(shì)，RSV組和Kp組在感染后第3、5天升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），第7天顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與RSV組和

3、Kp組相比，RSV+Kp組SD大鼠LI在感染后隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，第5、7天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.027，P<0.05）。
　?。?）肺組織病理：正常對(duì)照組SD大鼠肺泡結(jié)構(gòu)清楚，壁薄無充血，肺間質(zhì)無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。RSV組和Kp組在感染后第3天開始出現(xiàn)彌漫性肺泡間隔增厚與肺泡壁破壞，且均隨感染時(shí)間的延長(zhǎng)，肺泡結(jié)構(gòu)破壞逐漸加重。而 RSV+Kp組從第1天開始肺組織就有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并且在感染后同一時(shí)期較RSV組和Kp組更為嚴(yán)重。<

4、br>　?。?）mRNA轉(zhuǎn)錄水平：正常對(duì)照組SD大鼠肺組織中TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表達(dá)很低；隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，RSV組、Kp組和RSV+Kp組TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表達(dá)量逐漸增加，有時(shí)間依賴性。RSV組TLR4 mRNA表達(dá)在感染后第5、7 d升高，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），NF-κB mRNA在感染后第5 d升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），第7 d顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

5、01）；Kp組TLR4 mRNA表達(dá)在感染后第3 d升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），第5、7 d顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），NF-κB mRNA在感染后第3d升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），第5、7 d顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。RSV+Kp組較RSV組TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表達(dá)在感染后第5、7 d升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；較Kp組TLR4 mRNA表達(dá)在感

6、染后第7 d升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），NF-κB mRNA表達(dá)在感染后第5、7 d均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.373,P<0.05）。
　?。?）NF-κB蛋白表達(dá)：正常對(duì)照組中SD大鼠肺組織中NF-κB蛋白水平表達(dá)量較低，而在RSV組、Kp組和RSV+Kp組NF-κB蛋白隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)不斷增加。RSV組在感染后第5天明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），第7天顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

7、01）；Kp組NF-κB蛋白表達(dá)Kp組NF-κB蛋白表達(dá)在感染后第3天明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在感染后第5、7天顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與RSV組相比，RSV+Kp組NF-κB蛋白在感染后第3、5、7天升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與Kp組相比，RSV+Kp組NF-κB蛋白在感染后第5、7天升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）TNF-α、IL-1β含量：正常對(duì)照組中TNF-

8、α和IL-1β含量較低，而在RSV組、Kp組和RSV+Kp組TNF-α、IL-1β含量隨著感染時(shí)間點(diǎn)的延長(zhǎng)逐漸增加，有時(shí)間依賴性。RSV組和Kp組 TNF-α在感染后第5、7天明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=9.137,P<0.05）；與RSV組和Kp組相比，RSV+Kp組TNF-α含量較RSV組在感染后第5天升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），第7天顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），較Kp組第5、7天明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)

9、學(xué)意義（P<0.05）。RSV組和Kp組 IL-1β含量在感染后第5、7 d均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.737,P<0.01）；與RSV組和Kp組相比，RSV+Kp組IL-1β含量在感染后第5、7天均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.871,P<0.01）。
　　結(jié)論：
　?。?）通過滴鼻法建立RSV合并Kp感染誘發(fā)SD大鼠引起肺炎的動(dòng)物模型可行。
　　（2）RSV和Kp混合感染具有協(xié)同作用，加重肺部炎癥。