草莓離體再生及HAL1基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、本試驗(yàn)以“賽娃”、“紅花草莓”、“公四莓一號(hào)”、“阿迪”等幾個(gè)草莓品種為試材，研究了基本培養(yǎng)基、草莓基因型、激素配比、pH值、接種方式、繼代時(shí)間、暗培養(yǎng)時(shí)間對(duì)草莓不定芽再生的影響，優(yōu)化了草莓再生條件，建立了賽娃的葉片高效再生體系，獲得了抗草丁膦的抗性植株，建立了草莓品種“賽娃”的遺傳轉(zhuǎn)化體系。 主要取得以下研究結(jié)果：1基因型和再生培養(yǎng)基的初步篩選以田間采集的草莓葉片為試材，對(duì)基因型和再生培養(yǎng)基進(jìn)行了初步篩選，同時(shí)獲得了上述4個(gè)品

2、種的無(wú)菌試管苗.再生實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，賽娃草莓的葉片再生能力明顯高于其它3個(gè)品種，為此，試驗(yàn)選定賽娃做進(jìn)一步的再生和轉(zhuǎn)化的研究。 2不同因素對(duì)草莓試管苗葉片再生的影響 (1)基本培養(yǎng)基和激素配比對(duì)再生的影響基本培養(yǎng)基和激素配比直接影響草莓再生，MS培養(yǎng)基與MS(無(wú)機(jī)成分)+B5(有機(jī)成分)和1/2MS培養(yǎng)基相比，可得到較高的不定芽再生率。細(xì)胞分裂素KT與6-BA單獨(dú)使用效果不明顯，二者混合使用葉片的再生率與每個(gè)葉片的再生芽數(shù)

3、均明顯提高，而且再生不定芽長(zhǎng)勢(shì)良好。外植體可在MS+KT1.0mg/L+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基上再生，再生率達(dá)到91.7﹪，再生芽可在MS+KT1.0mg/L+BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L的培養(yǎng)基上增殖，再生苗適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS。 (2)蔗糖、瓊脂濃度和pH值對(duì)草莓葉片再生的影響蔗糖、瓊脂濃度和pH值也對(duì)草莓再生有顯著影響，蔗糖在組織中既是碳素來(lái)源和能量物質(zhì)，又是重要的滲透壓調(diào)節(jié)劑

4、。瓊脂是植物組織培養(yǎng)中良好的固定劑，對(duì)外植體起到一定的支撐作用。每種植物只有在適宜的pH值下才能得以正常生長(zhǎng)。本研究認(rèn)為在培養(yǎng)基中加入20g/L蔗糖，7g/L瓊脂，pH值調(diào)到5.8時(shí)對(duì)草莓葉片的再生具有促進(jìn)作用。 (3)其他因素對(duì)草莓葉片再生的影響在暗處理培養(yǎng)時(shí)，與以往研究結(jié)果不同的是：暗培養(yǎng)對(duì)草莓品種賽娃的再生沒(méi)有影響。苗齡影響草莓的再生，以30天葉齡為最佳取材時(shí)期。研究葉片放置于培養(yǎng)基上的方向?qū)θ~片再生的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)正放有利

5、于草莓葉片的再生。 3HAL1基因的轉(zhuǎn)化在建立賽娃葉片不定芽再生體系的基礎(chǔ)上，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法進(jìn)行賽娃的遺傳轉(zhuǎn)化研究。結(jié)果表明：預(yù)培養(yǎng)2d，菌液濃度為OD600=0.5，侵染時(shí)間為20分鐘，共培養(yǎng)2天的條件下轉(zhuǎn)化效率最高，MES的存在可以提高轉(zhuǎn)化效率。選擇培養(yǎng)中basta濃度過(guò)高不利于不定芽的分化，0.6mg/L的basta可有效地抑制非轉(zhuǎn)化芽的再生。不定芽對(duì)高濃度的Cef敏感，試驗(yàn)中以500mg/L的Cef作為農(nóng)桿菌