絲膠對2型糖尿病大鼠海馬損傷的保護(hù)作用.pdf

1、糖尿病是危害人類健康的代謝紊亂性疾病,其并發(fā)癥可嚴(yán)重影響患者的生命質(zhì)量。糖尿病時(shí)海馬損傷可引起以獲得性認(rèn)知和行為缺陷為特征的認(rèn)知功能障礙,因此糖尿病海馬損傷的防治成為糖尿病及其并發(fā)癥研究領(lǐng)域的重要課題。
　　 絲膠為繭絲中含有多種生物活性的水溶性蛋白質(zhì),約占蠶繭的30％,但在繅絲時(shí)常被廢棄,學(xué)者們一直在探討如何有效利用如此大量的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)。目前,絲膠在治療糖尿病方面的作用,僅有少數(shù)國內(nèi)學(xué)者進(jìn)行了初步探討,發(fā)現(xiàn)其可有效降低血糖。本

2、研究采用鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)致2型糖尿病大鼠模型,探討絲膠對2型糖尿病大鼠海馬損傷的保護(hù)作用,為防治糖尿病海馬損傷開辟新途徑。
　　 第一部分絲膠對2型糖尿病大鼠海馬HO-1表達(dá)的影響
　　 目的:
　　 觀察絲膠對大鼠海馬血紅素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)表達(dá)的影響。探討絲膠對2型糖尿病大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　 方法:
　　

3、 1.48只SD大鼠隨機(jī)分為4組,正常對照組、糖尿病模型組、絲膠治療組和陽性對照組,每組12只。糖尿病模型組、絲膠治療組和陽性對照組大鼠均采用STZ連續(xù)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型組大鼠不再作任何處理；絲膠治療組大鼠給予絲膠灌胃(2.4g／kg／d),陽性對照組大鼠給予二甲雙胍(55.33mg／kg／d)灌胃,時(shí)間均為35天。
　　 2.采用葡萄糖氧化酶法檢測各組大鼠的血糖(blood glucose

4、,BG)。
　　 3.采用Western Blotting法檢測海馬HO-1蛋白的表達(dá)。
　　 4.采用RT-PCR法檢測海馬HO-1 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組大鼠的BG:糖尿病模型組大鼠的BG為(29.45±4.82)mmol／L,明顯高于正常對照組大鼠(P<0.01)；絲膠治療組、陽性對照組大鼠的BG分別為(13.20±4.09)mmol／L、(13.18±2.30)mmol／L

5、,明顯低于糖尿病模型組大鼠(P<0.01)；且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　 2.糖尿病模型大鼠海馬HO-1蛋白及mRNA的表達(dá)均明顯高于正常對照組大鼠(P<0.01)。且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差別(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 絲膠可通過下調(diào)海馬中HO-1的表達(dá),減輕海馬神經(jīng)元損傷,發(fā)揮對糖尿病海馬損傷的保護(hù)作用。
　　 第二部分絲膠對2型糖尿病大鼠海馬G

6、H／IGF-1軸的作用
　　 目的:
　　 探討絲膠對2型糖尿病大鼠海馬生長激素(growth hormone,GH)／胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)軸的作用。
　　 方法:
　　 1.48只SD大鼠隨機(jī)分為4組,正常對照組、糖尿病模型組、絲膠治療組和陽性對照組,每組12只。糖尿病模型組、絲膠治療組和陽性對照組大鼠均采用鏈尿佐菌素(Strept

7、ozotocin,STZ)連續(xù)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型組大鼠不再作任何處理；絲膠治療組大鼠給予絲膠灌胃(2.4g／kg／d),陽性對照組大鼠給予二甲雙胍(55.33mg／kg／d)灌胃,時(shí)間均為35天。
　　 2.采用ELISA法檢測各組大鼠血清GH和IGF-1水平。
　　 3.采用Western Blotting法檢測海馬GH和生長激素受體(growthhormone receptor,G

8、HR)蛋白的表達(dá)。
　　 4.采用RT-PCR法檢測海馬GH、GHR和IGF-1 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組大鼠血清GH和IGF-1水平:糖尿病模型大鼠GH水平為(2.56±1.13)ng／ml,明顯高于正常大鼠(P<0.05)；IGF-1水平為(520.20±121.81)ng／ml,明顯低于正常大鼠(P<0.01)。絲膠治療組、陽性對照組大鼠GH水平分別為(1.36±0.57)ng／ml、

9、(1.37±0.64)ng／ml,均明顯低于糖尿病模型組大鼠(P<0.01)；IGF-1水平分別為(981.10±180.88)ng／ml、(1021.10±198.32)ng／ml,均明顯高于糖尿病模型組大鼠(P<0.01)；且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　 2.各組大鼠海馬GH的表達(dá):糖尿病模型組大鼠海馬GH蛋白及mRNA的表達(dá)均明顯高于正常組大鼠(P<0.01)；絲膠治療組和陽性對照組大鼠海馬

10、GH蛋白及mRNA的表達(dá)明顯低于糖尿病模型組大鼠(P<0.01,P<0.05)；且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　 3.各組大鼠海馬GHR的表達(dá):糖尿病模型組大鼠海馬GHR蛋白及mRNA的表達(dá)明顯低于正常組大鼠(P<0.01)；絲膠治療組和陽性對照組大鼠海馬GHR蛋白及mRNA的表達(dá)明顯高于糖尿病模型組大鼠(P<0.01,P<0.05)；且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。

11、　　 4.各組大鼠海馬IGF-1的表達(dá):與正常對照組大鼠比較,糖尿病模型組大鼠海馬IGF-1 mRNA的表達(dá)明顯下降(P<0.01)；絲膠治療組、陽性對照組大鼠海馬IGF-1 mRNA的表達(dá)較糖尿病模型組大鼠明顯升高(P<0.01)；且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.糖尿病大鼠存在GH／IGF-1軸紊亂,表現(xiàn)為血GH水平升高、IGF-1水平降低,海馬GH的表達(dá)升高、GHR

12、和IGF-1的表達(dá)降低。
　　 2.絲膠可通過調(diào)節(jié)糖尿病時(shí)GH／IGF-1軸紊亂,改善海馬損傷。
　　 第三部分絲膠對2型糖尿病大鼠海馬Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用
　　 目的:
　　 探討絲膠對2型糖尿病大鼠海馬蛋白激酶B(Akt)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用。
　　 方法:
　　 1.48只SD大鼠隨機(jī)分為4組,正常對照組、糖尿病模型組、絲膠治療組和陽性對照組,每組12只。糖尿病模型組、絲膠治療組和

13、陽性對照組大鼠均采用鏈尿佐菌素(Streptozotocin,STZ)連續(xù)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型組大鼠不再作任何處理；絲膠治療組大鼠給予絲膠灌胃(2.4g／kg／d),陽性對照組大鼠給予二甲雙胍(55.33mg／kg／d)灌胃,時(shí)間均為35天。
　　 2.采用Western Blotting法檢測海馬p-Akt、核轉(zhuǎn)錄因子kaPPa B(NF-κB)和前凋亡因子Bad(Bcl-XL／Bcl-2 a

14、ssociated death Promoter)蛋白的表達(dá)。
　　 3.采用RT-PCR法檢測海馬p-Akt、NF-κB和Bad mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組大鼠海馬p-Akt的表達(dá):糖尿病模型組大鼠海馬p-Akt蛋白及mRNA的表達(dá)均明顯低于正常組大鼠(P<0.01)；絲膠治療組和陽性對照組大鼠海馬p-Akt蛋白及mRNA的表達(dá)明顯高于糖尿病模型組大鼠(P<0.01,P<0.05)；且絲膠治

15、療組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　 2.各組大鼠海馬NF-κB的表達(dá):糖尿病模型組大鼠海馬NF-κB蛋白及mRNA的表達(dá)明顯低于正常組大鼠(P<0.01)；絲膠治療組和陽性對照組大鼠海馬NF-κB蛋白及mRNA的表達(dá)明顯高于糖尿病模型組大鼠(P<0.01)；且絲膠治療組與陽性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　 3.各組大鼠海馬Bad的表達(dá):與正常對照組大鼠比較,糖尿病模型組大鼠海馬Bad蛋白