MSCs及NSCs的分化、相互影響及對缺氧缺血性腦損傷的治療作用.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文MSCs及NSCs的分化、相互影響及對缺氧缺血性腦損傷的治療作用姓名：巨容申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：封志純20080425中文摘要法：新生7日齡乳鼠結(jié)扎左頸總動脈加8％氧氮混合氣吸入。并通過以下幾個方面判斷模型是否成功：在密閉缺氧艙中的表現(xiàn)，體重增長情況，腦組織病理形態(tài)改變及Y迷宮測試。結(jié)果乳鼠結(jié)扎頸總動脈后2h，進入密閉缺氧艙后不久即出現(xiàn)不同程度的缺氧癥狀：躁動不安、全身皮膚發(fā)紺、站立不穩(wěn)，爬行時

2、右后肢呈拖步，并逐漸出現(xiàn)全身肌肉顫動、不能翻身、自發(fā)或央尾左旋、抽搐、甚至昏迷等表現(xiàn)。復(fù)氧后lh大部分表現(xiàn)為自發(fā)或央尾向左側(cè)旋轉(zhuǎn)運動。體重增長及運動功能發(fā)育明顯落后于對照組，病理改變可見腦組織出現(xiàn)大片壞死，細胞溶解、破壞；后期有神經(jīng)膠質(zhì)細胞增生，瘢痕形成。結(jié)論結(jié)扎新生鼠左頸總動脈加低濃度氧氣吸入可成功復(fù)制HIBD的動物模型。關(guān)鍵詞：缺氧缺血；腦損傷；動物模型；Y迷宮第二章神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定目的研究胚胎神經(jīng)干細胞的分離、純化、傳代

3、及分化規(guī)律。方法1人NSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定取1224周胎齡水囊引產(chǎn)的新鮮人胚胎，無菌分離胚胎腦組織，制成單細胞懸液進行培養(yǎng)及凍存。采用有限稀釋法進行克隆、傳代，并用免疫細胞化學(xué)染色法對傳代及分化細胞進行鑒定。2鼠NSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定取15～17d胎鼠，分離胎鼠海馬及室周腦組織，制成單細胞懸液進行培養(yǎng)及凍存。采用有限稀釋法進行克隆、傳代，并用免疫細胞化學(xué)染色法對傳代及分化細胞進行鑒定。結(jié)果分離培養(yǎng)的人及鼠胚胎神經(jīng)干細胞呈圓球狀，

4、飽滿，折光性強。35d時，即可形成由十到幾十個細胞組成的細胞球。傳代培養(yǎng)后，又可形成新的神經(jīng)球。凍存細胞復(fù)蘇后也能獲得良好生長的神經(jīng)球。海馬、室管膜下區(qū)的神經(jīng)干細胞數(shù)量較多，紋狀體區(qū)的最少，用LSD進行兩兩比較，除鼠的紋狀體區(qū)與皮質(zhì)的比較無差異外，其它各部比較差異有顯著性(尸O05)。神經(jīng)球能被BrdU標(biāo)記，Nestin免疫化學(xué)染色呈陽性。神經(jīng)球在含血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)板上約2h就可見神經(jīng)球貼壁，ld后神經(jīng)球向外長出突起，細胞逐漸從神經(jīng)球呈