大鼠動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)骨質(zhì)疏松模型的建立及功能紅曲制劑防治作用的研究.pdf

1、[目的]
　　 采用高脂飼養(yǎng)及大劑量維生素D3損傷血管建立大鼠動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)骨質(zhì)疏松模型，通過觀察大鼠動(dòng)脈的血脂變化，血管病理變化、骨形態(tài)學(xué)變化、骨無(wú)機(jī)物和有機(jī)物含量檢測(cè)、骨生物力學(xué)檢測(cè)及骨密度檢測(cè)等手段，觀察動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)骨質(zhì)疏松的模型特點(diǎn)，探討其發(fā)生機(jī)制。研究同時(shí)，還通過該動(dòng)物模型，觀察功能紅曲制劑對(duì)動(dòng)脈硬化與骨質(zhì)疏松的防治作用，與血脂康和淫羊藿進(jìn)行對(duì)照比較，探討藥物的干擾作用并探討大鼠抗動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)骨質(zhì)疏松的作用機(jī)

2、制。
　　 [方法]
　　 1長(zhǎng)期高脂+大劑量維生素D3致大鼠動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)骨質(zhì)疏松實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷奶接戇x取3月齡SPF級(jí)雄性SD大鼠20只，體重(252.8±16.7)g，隨機(jī)分為2組，對(duì)照組(Cont，10只)：實(shí)驗(yàn)開始時(shí)蒸餾水5ml·kg-1·d-1灌胃；模型組(V.H，10只)：實(shí)驗(yàn)開始時(shí)以高脂乳劑(5％膽固醇、1％膽酸鈉、0.5％丙基硫氧嘧啶)5ml·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)38d，停用高脂乳劑，用常規(guī)飼料飼養(yǎng)2

3、w后，再用維生素D3(1×106U·kg-1·d-1)連續(xù)灌胃3d，5d后，再用高脂乳劑灌胃，連續(xù)28d。各組大鼠飼養(yǎng)條件相同，平均每6d記錄一次體重情況，實(shí)驗(yàn)為期88d(含觀察期)。
　　 所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第14d、13d各行頸部皮下注射鹽酸四環(huán)素(37.5mg/kg)，作為第1次熒光標(biāo)記，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第4d、3d各行頸部皮下注射鈣黃綠素(10mg/kg)作為第2次熒光標(biāo)記，以在骨表面形成綠色雙熒光標(biāo)志，兩次熒光標(biāo)記間隔時(shí)間

4、為10d。實(shí)驗(yàn)第29d，第39d經(jīng)大鼠眼眶靜脈叢取血?jiǎng)討B(tài)監(jiān)測(cè)血脂水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，大鼠心臟取血處死，分離血清作生化指標(biāo)(總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、鈣、磷)測(cè)定；取胸主動(dòng)脈，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析；分離右脛骨進(jìn)行骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)定；分離右股骨作骨密度測(cè)定、骨成份(骨鈣、磷、以及羥脯氨酸)測(cè)定、生物力學(xué)三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)。
　　 2功能紅曲制劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化與骨質(zhì)疏松防治作用的研究選

5、取3月齡SPF級(jí)雄性SD大鼠62只，體重(251.8±18.3)g，隨機(jī)分為7組，基礎(chǔ)對(duì)照組(BAS，6只)實(shí)驗(yàn)0天；對(duì)照組(Cont，10只)：實(shí)驗(yàn)開始時(shí)蒸餾水5ml·kg-1·d-1灌胃；模型組(V.H，10只)、模型+血脂康組(V.H+XZK，9只)、模型+功能紅曲制劑組(V.H+RK，9只)、模型+淫羊藿組(V.H+Epi.，9只)、模型+功能紅曲制劑+淫羊藿組(V.H+R.E，9只)，從實(shí)驗(yàn)開始時(shí)以高脂乳劑(5％膽固醇、1％膽

6、酸鈉、0.5％丙基硫氧嘧啶)5ml·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)38d。停用高脂乳劑，用常規(guī)飼料飼養(yǎng)2w后，再用維生素D3(1×106U·kg-1·d-1)連續(xù)灌胃3d，觀察5d后，再用高脂乳劑灌胃，連續(xù)28d在灌胃高脂乳劑后間隔3h以上再分別給予蒸餾水(5ml·kg-1·d-1)、血脂康顆?；鞈乙?107mg·kg-1·d-1)、紅曲制劑混懸液(5ml·kg-1·d-1)、淫羊藿混懸液(5g·kg-1·d-1)、功能紅曲制劑+淫羊藿混懸

7、液(5ml·kg-1·d-1)。各組大鼠飼養(yǎng)條件相同，平均每6d記錄一次體重情況，實(shí)驗(yàn)為期88d(含觀察期)。
　　 所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第14d、13d各行頸部皮下注射鹽酸四環(huán)素(37.5mg/kg)，作為第1次熒光標(biāo)記，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第4d、3d各行頸部皮下注射鈣黃綠素(10mg/kg)作為第2次熒光標(biāo)記，以在骨表面形成黃色、綠色雙熒光標(biāo)志，兩次熒光標(biāo)記間隔時(shí)間為10d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，大鼠心臟取血處死，分離血清作生化指標(biāo)(總膽固醇

8、、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、鈣、磷)測(cè)定；取胸主動(dòng)脈，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色、von Kossa染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析；分離右脛骨進(jìn)行骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)定；分離右股骨作骨密度測(cè)定、骨成份(骨鈣、磷、以及羥脯氨酸)測(cè)定、生物力學(xué)三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)。
　　 [結(jié)果]
　　 1.長(zhǎng)期高脂+大劑量維生素D3(V.H)可致雄性大鼠產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)骨質(zhì)疏松(1)高脂喂食可使模型組大鼠體重增幅加大，并明顯超過對(duì)

9、照組(Cont)(P<0.01)，在連續(xù)3d給予超生理劑量的維生素D3注射液灌胃后，大鼠體重急劇下降，并表現(xiàn)為食欲不振，精神萎靡等狀態(tài)，此時(shí)對(duì)照組(Cont)組體重高于模型組(V.H)組大鼠(P<0.01)，繼續(xù)給予高脂喂食后，大鼠體重開始回升并重新超過對(duì)照組(Cont)組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (2)與對(duì)照組(Cont)相比，實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清生化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，模型組(V.H)在實(shí)驗(yàn)第29d，V.H組TC上升(P<0.01)

10、；實(shí)驗(yàn)第39d，V.H組TC、LDL-c均上升(P<0.01)，H/T、H/L均降低(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，V.H組TC、LDL-c升高(P<0.01)，H/T、H/L降低(P<0.01)，鈣含量升高(P<0.01)。
　　 (3)與對(duì)照組(Cont)相比，模型組(V.H)胸主動(dòng)脈管壁管腔明顯呈不規(guī)則狀且增大，內(nèi)皮的完整性遭破壞，中膜明顯萎縮，彈性纖維層結(jié)構(gòu)不清，排列疏松，延展性降低，內(nèi)外壁輪廓凹凸不平或殘缺不整，粥樣硬化

11、斑塊內(nèi)鈣化明顯。
　　 (4)與對(duì)照組(Cont)相比，模型組(V.H)組大鼠的骨組織變化表現(xiàn)有，大鼠脛骨上段松質(zhì)骨骨小梁間隔增寬，分布松散。分布面積減小(P<0.01)，骨小梁數(shù)目減少(P<0.01)，骨形成率(BFR/TV、BFR/BS)下降(P<0.01)。股骨骨礦鹽含量下降(P<0.01)，股骨全骨密度下降(P<0.01)，生物力學(xué)參數(shù)：最大載荷及斷裂載荷均顯著下降(P<0.05)。
　　 2功能紅曲制劑和血脂康

12、對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化防治作用的研究(1)功能紅曲制劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治作用①血脂檢測(cè)顯示，與模型組(V.H)相比，功能紅曲制劑使血清TC、TG、LDL-c明顯降低(P<0.01)，而對(duì)HDL-c有明顯升高作用(P<0.01)，H/T、H/L也升高(P<0.01)，同時(shí)還可顯著降低血清Ca、P含量(P<0.01)。
　　 ②大鼠動(dòng)脈形態(tài)學(xué)顯示，與模型組(V.H)相比，功能紅曲制劑組(V.H+RK)內(nèi)、中、外膜結(jié)構(gòu)尚算完整，無(wú)大片的鈣化

13、斑塊沉積，但彈力纖維疏松，延展性降低，部分?jǐn)嗔选?br>　　 (2)血脂康對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治作用①血脂檢測(cè)顯示，與模型組(V.H)相比，血脂康使血清TC、LDL-c明顯降低(P<0.01)，對(duì)HDL-c升高作用不明顯，但H/T、H/L顯著升高(P<0.01)，同時(shí)還可顯著降低血清P含量(P<0.01)，對(duì)血清鈣含量影響不大。
　　 ②大鼠動(dòng)脈形態(tài)學(xué)顯示，與模型組(V.H)相比，血脂康(V.H+XZK)內(nèi)、外膜結(jié)構(gòu)尚算完整，中

14、膜層次分明，但彈力纖維疏松，結(jié)構(gòu)清晰，延展性降低，無(wú)大片的鈣化斑塊沉積，但彈力纖維疏松，延展性降低。
　　 (3)紅曲與血脂康對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治作用比較①血脂檢測(cè)顯示，與血脂康組(V.H+XZK)相比，功能紅曲制劑使血清LDL-c明顯降低(P<0.01)，對(duì)HDL-c、H/T值有明顯升高作用(P<0.05)。
　　 ②大鼠動(dòng)脈形態(tài)學(xué)顯示，與血脂康組(V.H+XZK)相比，功能紅曲制劑組(V.H+RK)中膜結(jié)構(gòu)更加完整，

15、鈣化斑較小。
　　 3功能紅曲制劑和淫羊藿對(duì)骨質(zhì)疏松防治作用的研究(1)功能紅曲制劑對(duì)骨質(zhì)疏松的防治作用功能紅曲制劑組(V.H+RK)與模型組相比，骨小梁分布面積增大(P<0.01)，骨小梁面積百分?jǐn)?shù)、骨小梁厚度、熒光周長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)均明顯增加(P<0.01)，骨形成率BFR/TV、BFR/BS均升高(P<0.05)。骨鈣含量變化不大。功能紅曲制劑使最大撓度降低(P<0.05)、最大載荷、斷裂載荷、剛度系數(shù)明顯增高(P<0.05)。<

16、br>　　 (2)淫羊藿對(duì)骨質(zhì)疏松的防治作用淫羊藿(V.H+Epi.)組與模型組相比，骨小梁結(jié)構(gòu)連續(xù)而細(xì)密，骨小梁面積百分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)目、熒光周長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)均顯著增加(P<0.01)，而骨小梁分離度明顯降低(P<0.01)，骨礦化沉積率、骨形成率(BFR/TV、BFR/BV、BFR/BS)也明顯升高(P<0.05)。淫羊藿還可以使彈性載荷、彈性模量升高(P<0.05)，最大撓度降低(P<0.05)，增加骨鈣含量(P<0.05)，提高腰椎骨

17、密度(P<0.01)。
　　 (3)功能紅曲制劑+淫羊藿混懸液對(duì)骨質(zhì)疏松的防治作用功能紅曲制劑+淫羊藿混懸液(V.H+R.E)組與模型組相比，骨小梁結(jié)構(gòu)比較連續(xù)而粗密，骨小梁面積百分?jǐn)?shù)、骨小梁厚度、均升高(P<0.01)，骨小梁分離度降低(P<0.05)，熒光周長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)、骨礦化沉積率、骨形成率(BFR/TV)增加(P<0.05)。紅曲制劑+淫羊藿混懸液可以降低最大撓度、斷裂撓度(P<0.05)，提高骨鈣、骨鎂以及骨羥脯氨酸含量(

18、P<0.05)。
　　 (4)功能紅曲制劑與淫羊藿對(duì)骨質(zhì)疏松的防治作用比較功能紅曲制劑組與淫羊藿(V.H+Epi.)組相比，功能紅曲制劑組骨小梁面積百分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)目、腰椎骨密度均降低(P<0.05)，骨小梁分離度升高(P<0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.長(zhǎng)期高脂飲食加上大劑量維生素D3(V.H)造成血管壁損傷，可導(dǎo)致大鼠血脂代謝異常、動(dòng)脈粥樣硬化，并可引起骨質(zhì)疏松。
　　 2.功能紅曲制劑能有效