三氟拉嗪對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、腦血管疾病(cerebrovascular diseases)的發(fā)病率、死亡率和致殘率很高，與惡性腫瘤、心臟病并列為導(dǎo)致全球人口死亡的三大疾病，根據(jù)新近的流行病學(xué)資料，我國(guó)腦血管疾病在人口死因中居第二位，僅次于惡性腫瘤。在腦缺血再灌注損傷中鈣調(diào)蛋白(CaM)參與細(xì)胞內(nèi)多種鈣介導(dǎo)的生物代謝過(guò)程，是一種多功能的鈣結(jié)合蛋白，其作用途徑復(fù)雜多樣。目前，對(duì)于CaM在腦缺血過(guò)程中作用的研究越來(lái)越多。三氟拉嗪(Trifluoperazine，TFP)

2、作為特異性的CaM抑制劑在相關(guān)研究領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。在整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已證實(shí)可明顯縮小大鼠腦缺血再灌注后的梗死面積。但其保護(hù)作用機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型，分析TFP對(duì)大鼠腦缺血的影響，包括病理學(xué)變化，海馬區(qū)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(long-term potentiation，LTP)和腦電圖(EEG)的變化，以及TFP對(duì)海馬神經(jīng)元瞬時(shí)外向鉀離子通道的影響，探討TFP的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制。 材料與方法

3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(CON)，缺血組(ISC)及TFP治療組(TFP)。采用線栓法制作大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型，缺血手術(shù)30min后，TFP組腹腔注射TFP(5mg/kg)，ISC組腹腔注射等量生理鹽水。缺血1h后，拔出線栓進(jìn)行再灌注。CON組只分離血管，不進(jìn)行線栓，腹腔注射等量生理鹽水。記錄左右側(cè)大腦PP-DG通路(穿通纖維一齒狀回通路)間的LTP以及腦電圖(EEG)。分析心率變異性(HRV)以及EEG的

4、樣本熵。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠取腦，行氯化三苯基四氮唑(TTC)以及蘇木精和伊紅(HE)染色。 膜片鉗部分：9-14d SD大鼠，斷頭取腦后采用機(jī)械和酶解相結(jié)合的方法急性分離海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，靜置貼壁于蓋玻片上。阻斷鈉通道、鈣通道和延遲整流鉀通道，記錄瞬時(shí)外向鉀通道電流。4分鐘后，加入終濃度10<'-5>mmol/L的TFP，記錄加藥前后電流變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±S.E.M)表示，數(shù)據(jù)經(jīng)

5、t-檢驗(yàn)，當(dāng)p<0.05時(shí)認(rèn)為結(jié)果有顯著性差異。 結(jié)果 1， TFP組TTC染色缺血面積明顯小于ISC組，HE染色神經(jīng)組織損傷比：ISC組輕。 2， TFP組LTP誘發(fā)率高于ISC組，雙側(cè)興奮性突觸后電位斜率和群峰電位幅值均低于ISC組。 3， TFP組EEG樣本熵在缺血側(cè)高于ISC組，在非缺血側(cè)低于ISC組。 4，海馬神經(jīng)元的膜片鉗檢測(cè)表明TFP給藥后，可促進(jìn)瞬時(shí)外向鉀通道失活，抑制其失活后的恢