氟西汀預(yù)處理對SD大鼠局部腦缺血再灌注損傷保護作用的研究.pdf

1、目的： 采用Sprague-Dawley(SD)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，通過觀察神經(jīng)功能缺損評分、腦梗死體積、腦組織病理形態(tài)及白細胞介素-1β (Interleukine-1β，IL-1β) 、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表達情況，探討預(yù)防性應(yīng)用氟西汀能否減輕SD大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，是否具有神經(jīng)保護作用及其可能的機制。 方法： 72只健康雄性SD大鼠，體重180-220g，按隨機化原

2、理分成3組：假手術(shù)組(n=24)、缺血再灌注組(簡稱對照組，n=24)、氟西汀組(n=24)，各組按缺血2h再灌注0h(n=6)、2h(n=6)、6h(n=6)、24h(n=6)分為4個亞組。氟西汀組大鼠術(shù)前14天予氟西汀(2.0mg/kg/d)行灌胃治療，1次/天；假手術(shù)組和對照組均于術(shù)前14天胃內(nèi)灌注等容積0.9％氯化鈉溶液(簡稱生理鹽水)，1次/天。 假手術(shù)組行頸部正中切口，分離、暴露血管后縫合皮膚；對照組和氟西汀組利用改

3、良Longa-Zea氏線栓法制備SD大鼠右側(cè)大腦中動脈閉塞的腦缺血再灌注模型，于插線2h后拔出栓線，實行再灌注。參考Zea-Longa 5分制評分標(biāo)準進行神經(jīng)功能缺損評分。各組于不同再灌注時間點斷頭取腦后以2％氯化三苯四唑啉(2，3，5-Triphenyl tetrazalium chloride，TTC)染色，判斷缺血部位，用圖像分析系統(tǒng)測量梗死體積；行蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin，HE)染色觀察腦組織病理形態(tài)；免

4、疫組織化學(xué)方法觀察IL-1β、Caspase-3的表達。 分別比較： (1)腦梗死體積、IL-1β、Caspase-3在對照組不同再灌注時間點的動態(tài)變化； (2)腦梗死體積、IL-1β、Caspase-3在氟西汀組不同再灌注時間點的動態(tài)變化； (3)對照組與假手術(shù)組各相同再灌注時間點神經(jīng)功能缺損評分、腦梗死體積、腦組織病理形態(tài)以及IL-1β、Caspase-3的表達； (4)氟西汀組與對照組各相同

5、再灌注時間點神經(jīng)功能缺損評分、腦梗死體積、腦組織病理形態(tài)以及IL-1β、Caspase-3的表達。 結(jié)果： 1．神經(jīng)功能缺損評分：相同再灌注時間點，對照組較假手術(shù)組神經(jīng)功能缺損癥狀明顯，差異具有顯著性意義(p<0.01)；氟西汀組較對照組神經(jīng)功能缺損評分降低，其中再灌注0h、2h及6h，兩組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)，再灌注24h，兩組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。 2．腦梗死體積比較：

6、假手術(shù)組、對照組及氟西汀組缺血對側(cè)腦組織于缺血后各再灌注時間點均未見明顯梗死灶。對照組及氟西汀組缺血側(cè)腦組織均于缺血2h即出現(xiàn)梗死灶，再灌注24h內(nèi)均隨再灌注時間的延長腦梗死體積逐漸增大，兩組組內(nèi)各再灌注時間點間比較差異均具有顯著性意義(p<0.01)；相同再灌注時間點，對照組較假手術(shù)組腦梗死體積明顯增大，差異有顯著性意義(p<0.01)，氟西汀組較對照組腦梗死體積減小，其中再灌注0h、2h及6h，兩組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.

7、05)，再灌注24h，兩組間比較差異具有顯著性意義(p<0.01)。 3．腦組織病理形態(tài)觀察：假手術(shù)組、對照組及氟西汀組缺血對側(cè)腦組織海馬區(qū)細胞層次分明，神經(jīng)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。對照組缺血側(cè)腦組織海馬區(qū)表現(xiàn)為神經(jīng)元數(shù)目減少，排列紊亂，神經(jīng)細胞皺縮，變性，且與周圍組織分界清楚，胞核固縮，組織間水腫明顯，可見空泡化改變，隨著再灌注時間延長，缺血神經(jīng)元損害加重，呈不可逆性神經(jīng)細胞損傷性改變，絕大多數(shù)神經(jīng)細胞壞死;氟西汀組再灌注24h內(nèi)隨

8、再灌注時間的延長，腦組織受損程度也逐漸加重，但缺血側(cè)海馬區(qū)與對照組相同時間點比較變性、壞死的神經(jīng)元減少，空泡化改變減輕，組織間水腫減輕。 4．免疫組化結(jié)果比較： (1)對照組組內(nèi)各再灌注時間點IL-1β和Caspase-3表達的動態(tài)變化：腦缺血2h，缺血側(cè)海馬區(qū)可見少量IL-1β陽性表達細胞，再灌注2h后陽性表達細胞數(shù)開始增加，至再灌注6h達高峰，隨后逐漸下降，各再灌注時間點間比較差異均有顯著性意義(p<0.01)；腦缺

9、血2h，缺血側(cè)海馬區(qū)可見散在的Caspase-3陽性表達細胞，再灌注2h后陽性表達細胞數(shù)開始增加，在再灌注24小時內(nèi)各時間點表達逐漸增高，各再灌注時間點間比較差異均有顯著性意義(p<0.01)。 (2)氟西汀組組內(nèi)各再灌注時間點IL-1β和Caspase-3表達的動態(tài)變化：腦缺血2h，缺血側(cè)海馬區(qū)可見少量IL-1β陽性表達細胞，再灌注2h后陽性表達細胞數(shù)開始增加，至再灌注6h達高峰，隨后逐漸下降，各再灌注時間點間比較差異均有顯著

10、性意義(p<0.01)；腦缺血2h，缺血側(cè)海馬區(qū)可見散在的Caspase-3陽性表達細胞，再灌注2h后陽性表達細胞數(shù)開始增加，在再灌注24小時內(nèi)各時間點表達逐漸增高，各再灌注時間點間比較差異均有顯著性意義(p<0.01)。 (3)對照組與假手術(shù)組比較：腦缺血2h，缺血側(cè)海馬區(qū)IL-1β和Caspase-3陽性表達細胞數(shù)均無明顯增加(p>0.05)，余相同再灌注時間點，缺血側(cè)海馬區(qū)兩者陽性表達細胞數(shù)均明顯增加，差異均具有顯著性意義

11、(p<0.01)。 (4)氟西汀組與對照組比較：腦缺血2h，缺血側(cè)海馬區(qū)IL-1β和Caspase-3陽性表達細胞數(shù)均無明顯減少(p>0.05)，余相同再灌注時間點，缺血側(cè)海馬區(qū)兩者陽性表達細胞數(shù)均減少，其中再灌注2h及6h，兩組間比較均為p<0.05，再灌注24h，兩組間比較p<0.01。 結(jié)論： 1．腦缺血2h，缺血側(cè)海馬區(qū)可見少量IL-1β陽性表達細胞，再灌注2h后陽性表達細胞數(shù)開始增加，再灌注6h達高峰，

12、隨后逐漸下降；腦缺血2h，缺血側(cè)海馬區(qū)可見散在的Caspase-3陽性表達細胞，再灌注2h后陽性表達細胞數(shù)開始增加，在再灌注24小時內(nèi)各時間點表達逐漸增高，提示IL-1β、Caspase-3的表達均參與了腦缺血再灌注損傷的病理生理過程，加重了腦損傷。 2．預(yù)防性應(yīng)用氟西汀能減輕SD大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，減輕神經(jīng)功能缺損癥狀，縮小腦梗死體積，減輕神經(jīng)細胞變性、壞死及組織水腫，使缺血側(cè)海馬區(qū)IL-1β及Caspase-3表達減