RNA干擾HER-2-neu基因?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞增殖及其對(duì)孕激素敏感性的影響.pdf

1、目的：觀察shRNA表達(dá)質(zhì)粒靶向沉默HER—2/neu基因?qū)shikawa子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖及對(duì)孕激素敏感性的影響。 方法：針對(duì)HER—2/neu基因序列構(gòu)建短發(fā)夾狀siRNA真核表達(dá)載體(pSilencer4.1—CMV HER—2/neu)，轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa，分別于轉(zhuǎn)染24、48、72小時(shí)后，采用Western Blot法檢測(cè)p185蛋白的表達(dá)，Annexin V試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡，于轉(zhuǎn)染72h流式細(xì)胞

2、術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化；于轉(zhuǎn)染12h后各組分別加入不同濃度孕激素作用48h，用MTT法檢測(cè)不同濃度孕激素分別作用于未轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞增殖率的改變。 結(jié)果：測(cè)序證實(shí)成功構(gòu)建HER—2/neu的2個(gè)短發(fā)夾狀siRNA真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染Ishikawa細(xì)胞后，轉(zhuǎn)染了特異性HER—2/neu shRNA的細(xì)胞p185蛋白水平均明顯低于轉(zhuǎn)染無(wú)義對(duì)照序列的細(xì)胞；細(xì)胞凋亡分析顯示，HER—2/neu基因沉默的細(xì)胞凋亡率明顯增加(P<0.01)

3、；與非特異性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染shRNA72h后處于G0/G1期細(xì)胞增多，同時(shí)S期的細(xì)胞比例減少；MTT分析顯示RNAi與孕激素聯(lián)合作用組細(xì)胞增殖率明顯低于非特異性干涉組及空白對(duì)照組(P<0.01)。 結(jié)論：靶向HER—2/neu基因的短發(fā)夾狀siRNA可明顯降低p185蛋白的表達(dá)、增加細(xì)胞的凋亡并阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期；HER—2/neu基因沉默與孕激素聯(lián)合作用的Ishikawa子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖明顯受抑制并且細(xì)