巴曲酶用藥次數(shù)對腦缺血再灌注沙土鼠腦保護作用的影響.pdf

1、腦卒中(中風(fēng))是中老年人發(fā)病率較高的疾病。急性腦卒中的早期可表現(xiàn)為運動、感覺、認(rèn)知方面功能障礙及生活不能自理，如不能得到及時有效的干預(yù)，將遺留神經(jīng)功能缺陷，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給其家庭和社會造成極大的負(fù)擔(dān)。目前對腦卒中的治療方法主要包括急性期常規(guī)藥物治療及康復(fù)治療，其中超早期溶栓治療是治療缺血性腦卒中的最有效方法，但溶栓治療受時間、技術(shù)、設(shè)備的影響，使其應(yīng)用受到限制，因而探討針對缺血性腦卒中巴曲酶的最佳腦保護作用總量的研究及其安全性

2、顯得較為重要。 巴曲酶可直接作用于血漿纖維蛋白元，形成易于被纖溶系統(tǒng)清除的非交聯(lián)的纖維蛋白單體或多聚體，還可促進內(nèi)皮細胞釋放t-pA，且增強t-pA的作用，降低纖溶酶原活化劑抑制劑的活性，降低血漿纖維蛋白原，降低血小板黏附力。 巴曲酶對腦缺血后抗細胞凋亡的最佳總量實驗研究尚未有報道，因而探討巴曲酶對沙土鼠前腦缺血再灌注后抗細胞凋亡的最佳總量，可以為巴曲酶在臨床上的合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。 本課題選用不同總劑量的巴曲

3、酶沙土鼠腹腔注射觀察腦保護作用的強弱來探討其最佳總給藥劑量。在缺血再灌注模型的基礎(chǔ)上通過沙土鼠腹腔注射(8BU/Kg·次)巴曲酶，觀察不同用藥次數(shù)的海馬CA1區(qū)的細胞超微結(jié)構(gòu)變化以及流式細胞儀來檢測凋亡細胞比例來了解巴曲酶的抗細胞凋亡作用。 研究已表明，Bcl-2家族中Bcl-2和Bax是與細胞凋亡關(guān)系密切的兩個基因。Bcl-2為抗凋亡基因，可抑制各種因素誘導(dǎo)的細胞凋亡，保護并延長細胞壽命；Bax為促凋亡基因，一方面它自己有促進

4、凋亡的作用，另一方面它還能抑制Bcl-2的表達。通過統(tǒng)計不同次數(shù)用藥組的海馬CA1區(qū)Bcl-2、Bax陽性細胞數(shù)的情況來闡明巴曲酶的腦保護作用和Bcl-2、Bax的表達的關(guān)系，揭示巴曲酶腦保護作用的機制。 課題分為三個部分。第一部分：用流式細胞儀檢測方法來探討巴曲酶對沙土鼠腦缺血后海馬CA1區(qū)抗細胞凋亡作用的最佳總劑量；第二部分：通過電鏡觀察比較不同巴曲酶用藥總量對IR沙土鼠腦海馬CA1區(qū)超微結(jié)構(gòu)改變的影響；第三部分：巴曲酶對腦

5、缺血沙土鼠腦保護作用的可能機制的研究。 　研究結(jié)果： (一)IR后，模型組細胞凋亡數(shù)為10.36±2.58％，3次組為7.27±1.10％，4次用藥組細胞凋亡數(shù)為5.64±0.27％，5次用藥組細胞凋亡數(shù)為4.34±0.93％，6次組細胞凋亡數(shù)為4.68±1.29％，正常組細胞凋亡數(shù)為0.35+0.12％。經(jīng)統(tǒng)計分析，提示：泊IR組凋亡細胞數(shù)顯著高于各用藥組(P<0.05)，4次用藥組細胞凋亡率要低于3次用藥組，組間比較

6、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，5次用藥組細胞凋亡數(shù)顯著低于4次用藥組(P<0.05)，而5次用藥組與6次用藥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。這說明腦IR后5次用藥組腦保護作用效果好于3次和4次組，但是>5次的用藥腦保護作用并不好于5次用藥。 (二)超微結(jié)構(gòu)觀察顯示IR組細胞凋亡顯著，胞質(zhì)內(nèi)空泡明顯，線粒體腫脹，部分膜崩解，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔擴大，核膜部分皺折，染色體聚集靠邊，附于核膜碎裂。3次及4次用藥組細胞超微結(jié)構(gòu)改變輕

7、于IR組，但仍可見到胞質(zhì)內(nèi)細胞器空泡樣變，核周空泡，染色質(zhì)仍有斷裂靠近核膜的現(xiàn)象，可見到凋亡小體。5次用藥組的海馬CA1區(qū)細胞結(jié)構(gòu)損傷要明顯輕于3次及4次用藥組，胞質(zhì)內(nèi)空泡較少，核膜相對完整。而6次組和5次組超微結(jié)構(gòu)改變不明顯。這也說明5次的用藥效果要好于3次及4次用藥。 根據(jù)(一)(二)結(jié)果，我們認(rèn)為在腦IR后巴曲酶(8BU/Kg·次)5次用藥為沙土鼠腦保護的最佳總劑量。 (三)然后將沙土鼠隨機分為手術(shù)對照組，巴曲酶3

8、次用藥組，4次用藥組，5次用藥組，免疫組化檢測各組海馬CA1區(qū)Bcl-2、Bax陽性細胞數(shù)表達情況，結(jié)果顯示：隨著巴曲酶用藥次數(shù)增加,Bcl-2陽性細胞數(shù)逐漸增加，5次用藥組陽性細胞數(shù)最高，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而Bax陽性細胞數(shù)隨著巴曲酶的用藥次數(shù)的增加而逐漸減少，3次用藥組Bax陽性細胞數(shù)最多(45.82±4.27)而五次用藥組Bax陽性細胞數(shù)最少(35.85±2.49)，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)合(一)(二)的試驗結(jié)果我們