腺病毒介導(dǎo)bcl-2基因抑制鎘致人肝細(xì)胞WRL-68凋亡的研究.pdf

1、自從上世紀(jì)50年代早期腺病毒被發(fā)現(xiàn)以來，它已被人們廣泛的研究。由于腺病毒作為基因轉(zhuǎn)移的載體有許多優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已被廣泛的應(yīng)用于基因治療。本實(shí)驗(yàn)利用腺病毒作為載體介導(dǎo)目的基因bcl-2 到人肝細(xì)胞中。Bcl-2基因是細(xì)胞凋亡程序中重要的抗凋亡基因。鎘可以誘導(dǎo)機(jī)體多種組織細(xì)胞發(fā)生凋亡。本文對(duì)腺病毒介導(dǎo)的 bcl-2基因抑制鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡做了如下工作：
　　 1 重組腺病毒載體的構(gòu)建采用分子克隆的方法構(gòu)建含有目的基因 bcl-2的穿梭載體

2、pAdTrack-CMV，然后利用細(xì)菌內(nèi)同源重組法構(gòu)建重組腺病毒載體AdEasy-1，把 bcl-2基因克隆到腺病毒載體上。最后用磷酸鈣轉(zhuǎn)染法把重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染到 HEK-293 細(xì)胞中包裝。結(jié)果顯示：重組腺病毒載體在 HEK-293 細(xì)胞中包裝成功，出現(xiàn)病毒噬斑。
　　 2 bcl-2基因抗鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究將在 HEK-293 細(xì)胞中包裝好的重組腺病毒轉(zhuǎn)染人肝細(xì)胞 WRL-68 細(xì)胞，通過Western blot 法檢測(cè)