骨形成蛋白-7對游離脂肪酸誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的防治作用.pdf

1、[目的]游離脂肪酸(freefattyacids，F(xiàn)FAs)有重要的生理功能，晚近的研究還發(fā)現(xiàn)其參與了炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化、免疫反應(yīng)、細(xì)胞分化等病理生理過程。已有研究表明，由于各種原因(如：缺血、中毒、大量蛋白尿等情況)而被轉(zhuǎn)運(yùn)到腎小管的FFAs對腎小管上皮細(xì)胞具有細(xì)胞毒性作用。本研究所前期的研究也表明，油酸(oleicacid，OA，人體內(nèi)含量最豐富的FFAs)能促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)分化及纖維化。 不管最初腎損傷的病因如何

2、，腎小管間質(zhì)纖維化(renaltubulointerstitialfibrosis，TIF)都是所有慢性腎臟疾病(chronickidneydiseases，CKD)向終末期腎病(endstagerenaldiseases，ESRD)進(jìn)展的最終共同途徑之一。研究認(rèn)為：TIF的程度與腎功能的相關(guān)性比腎小球硬化與腎功能的相關(guān)性更密切，是反映腎功能下降嚴(yán)重程度和判斷預(yù)后的最重要指標(biāo)。TIF以腎間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatr

3、ix，ECM)過度沉積為主要特征。在TIF過程中，腎小管上皮細(xì)胞(renaltubularepithelialcells，RTECs)不但是受害者，而且也是間質(zhì)炎癥、纖維化的積極參與者。近年來的研究表明，在某些病理?xiàng)l件下，RTECs可以丟失其細(xì)胞表面標(biāo)志物而表現(xiàn)出肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast，MyoF，具有成纖維細(xì)胞功能)的表型，亦即發(fā)生小管上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelialtomesenchymaltransdiffe

4、rentiation，EMT)，分泌ECM。而肌成纖維細(xì)胞是介導(dǎo)TIF主要效應(yīng)細(xì)胞。 目前對TIF治療無特效的方法，故近年來對TIF的治療進(jìn)行了一系列的探索。最近，骨形成蛋白-7(bonemorphogeneticprotein-7，BMP-7)因其在糖尿病腎病、單側(cè)輸尿管梗阻(unilateralureteralocclusion，UUO)腎纖維化模型、殘腎腎纖維化模型、急性腎缺血、慢性腎缺血和急性腎盂腎炎等模型中對腎臟功能和

5、形態(tài)的保護(hù)作用而引起的人們的極大興趣。研究發(fā)現(xiàn)，BMP-7表達(dá)減少與腎臟損傷成正相關(guān)，而給予腎損傷動(dòng)物模型外源性BMP-7，則可在一定程度上逆轉(zhuǎn)腎損傷。協(xié)和醫(yī)科大學(xué)的研究也表明，BMP-7可抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)的RTECs轉(zhuǎn)分化。本研究旨在研究不同濃度BMP-7對OA誘導(dǎo)RTECs的轉(zhuǎn)分化的防治作用，以期為BMP-7在TIF的防治中應(yīng)用提供更進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法]1.應(yīng)用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)人腎小管上

6、皮細(xì)胞株(HK-2細(xì)胞)。 2.實(shí)驗(yàn)分三部分： (1)第一部分：不同濃度BMP-7(0、1、5、10、50ng/ml)刺激靜息的HK-2細(xì)胞48h，以普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞作為正常對照組。 (2)第二部分：不同濃度BMP-7(0、1、5、10、50ng/ml)+OA(400μmol/L)共同刺激培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞48h。其中0ng/mlBMP-7+OA組為單純OA處理組。以普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞作為正

7、常對照組。 (3)第三部分：不同濃度BMP-7(0、1、5、10、50ng/ml)預(yù)處理HK-2細(xì)胞24h后，再加入OA(400μmol/L)培養(yǎng)48h。其中0ng/mlBMP-7預(yù)處理組為單純OA處理組。以正常培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞為正常對照組。 3.應(yīng)用RT-PCR方法檢測各組細(xì)胞TGF-β1和α-SMA(平滑肌動(dòng)蛋白)mRNA的表達(dá)情況。 4.應(yīng)用ELISA方法檢測各組細(xì)胞TGF-β1蛋白的分泌情況。

8、[結(jié)果]1.不同濃度BMP-7對靜息培養(yǎng)RTECsTGF-β1mRNA、TGF-β1蛋白和α-SMAmRNA的表達(dá)影響與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 2.單純OA處理組TGF-β1mRNA、TGF-β1蛋白和α-SMAmRNA的表達(dá)顯著高于正常對照組(P＜0.05)；低濃度(1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)BMP-7+OA組與單純OA處理組相比較，RTECsTGF-β1mRNA表達(dá)、TGF-β1

9、蛋白表達(dá)和α-SMAmRNA的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；高濃度(50ng/ml)BMP-7+OA共同處理組的RTECsTGF-β1mRNA表達(dá)、TGF-β1蛋白表達(dá)和α-SMAmRNA的表達(dá)顯著低于單純OA處理組(P＜0.05)，而與正常對照組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3.低濃度(1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)BMP-7預(yù)處理24h后，RTECsTGF-β1mRNA表達(dá)、TGF-β1蛋

10、白表達(dá)和α-SMAmRNA的表達(dá)與未加BMP-7預(yù)處理的單純OA組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；高濃度(50ng/ml)BMP-7預(yù)處理組RTECsTGF-β1mRNA表達(dá)、TGF-β1蛋白表達(dá)和α-SMAmRNA的表達(dá)顯著低于未加BMP-7預(yù)處理的單純OA組(P＜0.05)，而與正常對照組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 [結(jié)論]1.OA可以誘導(dǎo)RTECs轉(zhuǎn)分化和TGF-β1的表達(dá)。 2.BMP-