食管癌組織中MT-1、-2與-3的表達(dá)差異及臨床意義.pdf

1、目的:食管癌是一種常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,對(duì)人類的健康已經(jīng)構(gòu)成嚴(yán)重的威脅。在國(guó)際上其病死率位居惡性腫瘤病死率的第七位,我國(guó)是食管癌的高發(fā)國(guó)家,其病死率位居惡性腫瘤病死率的第四位。雖然對(duì)于食管癌的發(fā)病機(jī)制已經(jīng)有了廣泛深入的研究,但其具體的發(fā)病機(jī)制至今并未完全明確,初步的研究表明食管癌的發(fā)生與發(fā)展與多種癌基因的激活和抑癌基因的失活長(zhǎng)期協(xié)同作用的結(jié)果。
　　 金屬硫蛋白(metallothionein,MT)于1957年在馬的腎中第一

2、次別發(fā)現(xiàn),是一類廣泛存在于生物體體內(nèi)的低分子量、富含半胱氨酸的蛋白質(zhì)。MT至少有四種同分異構(gòu)體,即MT-1、MT-2、MT-3和MT-4。它們?cè)诰S持金屬離子內(nèi)穩(wěn)態(tài)、重金屬的解毒、清除自由基等許多方面都具有重要的生物學(xué)功能。
　　 有關(guān)MT-1和MT-2的研究顯示,MT-1和MT-2要占所有MT的主體,除具有MT共有的生物學(xué)功能外,近年來的研究顯示MT-1、MT-2與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。Saga等對(duì)膀胱癌的研究和張瑞芬等對(duì)

3、乳腺癌的研究均顯示隨著腫瘤的病理分級(jí)的升高,MT-1和MT-2的陽(yáng)性表達(dá)率也相應(yīng)地增高。提示隨著腫瘤的惡性程度、侵襲力的上升,MT-1和MT-2的表達(dá)量也隨之增高。在食管癌方面,孫雪飛等用免疫組化的方法研究顯示食管癌的分化程度與MT-1、MT-2的表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。
　　 MT-3與其它MT一樣具有許多相同的生物學(xué)功能,此外,MT-3還具有抑制細(xì)胞增殖等方面的特殊功能,是神經(jīng)系統(tǒng)中第一個(gè)被鑒定的具有神經(jīng)元生長(zhǎng)抑制功能的蛋白質(zhì),其不

4、但抑制神經(jīng)元生長(zhǎng)及軸索形成,參與神經(jīng)元再生的調(diào)控,而且還與多種惡性腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切,目前對(duì)膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌和胃癌的研究顯示在不同的惡性腫瘤中MT-3的表達(dá)狀況也不盡相同,如:在正常膀胱中沒有MT-3的表達(dá),而在所有的膀胱癌中均存在MT-3表達(dá);在前列腺癌和前列腺上皮內(nèi)增生性病變中,MT-3免疫染色的差異很大,有些腫瘤細(xì)胞具有與神經(jīng)細(xì)胞相似的強(qiáng)烈染色,有些則全無(wú)染色。另有研究表明在胃癌中MT-3基因存在異常甲基化。MT-3同樣與

5、食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),田子強(qiáng)等應(yīng)用免疫組化方法研究顯示在食管癌中MT-3存在過表達(dá),此外,田子強(qiáng)等還應(yīng)用限制性酶切圖譜分析的方法研究表明食管癌中MT-3基因也存在異常甲基化。
　　 本課題應(yīng)用Western Blot法檢測(cè)新鮮食管癌標(biāo)本及切緣正常粘膜中MT-1、MT-2和MT-3的表達(dá)量,旨在研究MT-1、MT-2和MT-3在食管癌中的表達(dá)量的差異以及MT-1、MT-2和MT-3的表達(dá)量與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
　

6、　 方法:
　　 1、選取2008年7月至2009年7月在河北醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院胸外科行手術(shù)治療的食管癌患者70例,術(shù)中取腫瘤中心(去除壞死組織)及距腫瘤邊緣至少5cm的食管切緣組織,病理確認(rèn)食管殘端為正常食管粘膜上皮。用液氮罐轉(zhuǎn)入-70℃冰箱凍存。
　　 2、提取上述組織的全細(xì)胞蛋白,應(yīng)用Western Blot法檢測(cè)MT-1、MT-2和MT-3的表達(dá)量,用Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)掃膜,圖像輸出后用Ima

7、ge J圖像分析系統(tǒng)對(duì)圖像進(jìn)行光密度掃描,分析MT在食管癌組織和切緣正常組織中各條帶的光密度值。計(jì)算食管癌組織中MT的光密度值與內(nèi)參照蛋白GAPDH的光密度值的比值和切緣正常組織中MT的光密度值與內(nèi)參照蛋白GAPDH的光密度值的比值分別作為MT的表達(dá)量。
　　 3、應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)各MT在食管癌組織及切緣正常組織中的表達(dá)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;用方差分析的統(tǒng)計(jì)方法將各MT在食管癌中

8、的表達(dá)量與臨床病例參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、MT-1、MT-2在食管癌組織中的表達(dá)量高于切緣正常組織(t=5.214,P=0.000)。
　　 2、MT-3在食管癌組織中的表達(dá)量高于切緣正常組織(t=4.287,P=0.000)。
　　 3、食管癌組織中病理分期越高M(jìn)T-1、MT-2的表達(dá)量越高(F=4.581,P=0.009);分化程度越差MT-1、MT-2的表達(dá)量越高(F=11.4

9、51,P=0.000);腫瘤部位不同的組織中MT-1、MT-2的表達(dá)量無(wú)顯著差異(F=0.253,P=0.778)。
　　 4、食管癌組織中病理分期越低MT-3的表達(dá)量越高(F=7.237,P=0.001);分化程度越高M(jìn)T-3的表達(dá)量越高(F=5.357,P=0.010);腫瘤部位不同的組織中MT-3的表達(dá)量無(wú)顯著差異(F=.038,P=0.963)。
　　 結(jié)論:
　　 1、MT-1、MT-2與MT-3在食管

10、癌組織中的表達(dá)量均顯著高于切緣正常組織的表達(dá)量。說明MT-1、MT-2和MT-3的高表達(dá)與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
　　 2、晚期和惡性程度較高的食管癌組織中,MT-1、MT-2傾向于高表達(dá),說明隨著食管癌的發(fā)生和進(jìn)一步的發(fā)展MT-1、MT-2的表達(dá)量也隨之增高;MT-1、MT-2的表達(dá)量的多少對(duì)判斷腫瘤的惡性程度有積極意義;在腫瘤部位不同的組織中MT-1、MT-2的表達(dá)量無(wú)明顯差異。
　　 3、早期和惡性程度較低的食