雞、豬、牛IgMμ鏈基因的體外表達(dá)及單克隆抗體的研制.pdf

1、隨著規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，畜禽傳染病已成為對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害最嚴(yán)重的一類疾病，它不僅能造成大批畜禽死亡和畜產(chǎn)品的損失，影響人們生活和對(duì)外貿(mào)易，而且某些人畜共患的傳染病還能給人們健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅。尤其是現(xiàn)代化的養(yǎng)殖業(yè)，畜禽飼養(yǎng)高度集中，調(diào)運(yùn)移動(dòng)頻繁，更易受到傳染病的侵襲。因此，迫切需要建立一種早期診斷方法進(jìn)行快速診斷以控制病情，淘汰感染畜禽，減少損失，降低危害。 IgM是機(jī)體初次體液免疫反應(yīng)中最早產(chǎn)生的免疫球蛋白，因此在抗感染免疫的早期起

2、著十分重要的作用，可通過(guò)檢測(cè)IgM抗體進(jìn)行疫病的血清學(xué)早期診斷。本試驗(yàn)建立的抗IgM μ鏈單抗診斷方法對(duì)于研究這些疾病的免疫特性、診斷和防制技術(shù)均有重要意義。本研究以原核表達(dá)的IgMμ蛋白，采用長(zhǎng)程免疫法免疫BALB／c小鼠，取四免后的小鼠脾細(xì)胞與SP2／0骨髓瘤細(xì)胞在PEG4000作用下進(jìn)行細(xì)胞融合，融合率均達(dá)90％以上，將重組桿狀病毒表達(dá)的雞、豬、牛真核IgMμ蛋白同時(shí)作為包被抗原建立間接ELISA，用于檢測(cè)篩選雜交瘤細(xì)胞上清中的抗

3、體，三種ELISA檢測(cè)均為陽(yáng)性的細(xì)胞克隆經(jīng)有限稀釋法進(jìn)行三次亞克隆，獲得一株能穩(wěn)定分泌抗雞IgMμ單抗的雜交瘤細(xì)胞株，命名為1H2。將此株雜交瘤細(xì)胞經(jīng)反復(fù)凍存、復(fù)蘇及多次傳代，仍能分泌高效價(jià)抗體，亞型鑒定為IgG<,1> κ型，腹水效價(jià)為1:1×10<'6>。間接ELISA和Western-blot檢測(cè)顯示，這株單抗具有良好的反應(yīng)原性，能敏感、特異地檢測(cè)出雞、豬和牛血清中的IgM。 本研究所獲得的抗IgMμ鏈單克隆抗體為雞、豬和