血管生成因子AGGF1對(duì)后肢缺血小鼠的治療作用研究.pdf

1、外周血管疾病(PeripheralArterialDisease,PAD)通常由動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致,它會(huì)導(dǎo)致外周血管的狹窄甚至是閉塞,從而阻止血流流入到下肢末端。隨著現(xiàn)代老年化程度的加劇,PAD的發(fā)病率也呈上升趨勢(shì),在成年人中的發(fā)病率達(dá)到了12％。在美國(guó)大約有8百萬(wàn)到1千2百萬(wàn)PAD患者。德國(guó)的流行病學(xué)報(bào)道大于65歲的老人中,女性發(fā)病率達(dá)到17%,而男性甚至達(dá)到20%?，F(xiàn)有病例表明,PAD嚴(yán)重地影響了生活質(zhì)量,患病率和死亡率增加,嚴(yán)重下肢

2、缺血患者1年生存率為25%。并且,46%-71%的PAD患者同時(shí)患有冠心病,不少于10%的PAD患者還有腦血管疾病。
　　一些PAD患者可能會(huì)要求下肢截肢,從而緩解疼痛,改善生活環(huán)境。為了避免截肢或者其他更為嚴(yán)重的后果,往往采取血管造影,支架或者血管外科手術(shù),使得血流得以恢復(fù)。然而,接受血管手術(shù)的PAD患者的長(zhǎng)期生存率遠(yuǎn)低于接受類似手術(shù)的冠心病患者的生存率。更為重要的是,很多PAD患者并不一定適合血管支架或者血管外科手術(shù)。所以,采

3、用血管生成因子進(jìn)行治療性血管新生,加速血管新生和微環(huán)境循環(huán),在最近20年中被認(rèn)為是一種新的大有發(fā)展前途的PAD治療手段。不論以何種注射方式,例如DNA質(zhì)粒或者重組蛋白,將血管生成因子導(dǎo)入,可能加速血管新生,加快側(cè)枝循環(huán),也有利于血流再灌到缺血組織中。
　　通過(guò)實(shí)驗(yàn),主要驗(yàn)證了作為新的血管生成因子AGGF1是否能作為血管新生治療藥物用于嚴(yán)重后肢缺血小鼠的治療,從而驗(yàn)證是否能用于下肢缺血疾病患者的治療。在整個(gè)試驗(yàn)中,能得到了以下結(jié)果:

4、
　　(1)注射到腓腸肌的真核表達(dá)質(zhì)粒AGGF1能夠成功的轉(zhuǎn)錄生成mRNA并翻譯生成AGGF1蛋白。真核表達(dá)質(zhì)粒注射到腓腸肌后,發(fā)現(xiàn)外源性的AGGF1可以持續(xù)高表達(dá)2周,隨著時(shí)間延長(zhǎng)到4周,外源性AGGF1的表達(dá)量降低,接近開(kāi)始的水平。
　　(2)AGGF1的高表達(dá)可增加缺血后肢的血流流速。采用高分辨率小動(dòng)物超聲檢測(cè)小鼠后肢血流。結(jié)扎手術(shù)后一天,發(fā)現(xiàn)結(jié)扎腿比假手術(shù)腿的血流比例出現(xiàn)了明顯的下降,僅為10%左右。彩色脈沖多普勒超

5、聲結(jié)果表現(xiàn)注射AGGF1后肢缺血小鼠的血流流速明顯高于對(duì)照組小鼠的后肢血流,DNA注射后7天,14天和28天,其P值分別為0.016,0.0034和0.0012。
　　對(duì)缺血后肢進(jìn)行了行為學(xué)評(píng)分,主要指標(biāo)評(píng)分指標(biāo)為后肢組織壞死和運(yùn)動(dòng)能力損傷。注射AGGF1的后肢缺血小鼠的這2項(xiàng)指標(biāo)都明顯低于注射空質(zhì)粒的后肢缺血小鼠。
　　(3)AGGF1高表達(dá)能抑制缺血引起的組織壞死。通過(guò)對(duì)注射DNA治理后7天的后肢缺血老鼠腓腸肌組織進(jìn)行切

6、片HE染色,發(fā)現(xiàn)AGGF1可以明顯抑制由缺血導(dǎo)致的細(xì)胞組織壞死情況。
　　(4)過(guò)表達(dá)AGGF1可以加速缺血的腓腸肌的血管新生。將注射質(zhì)粒的后肢缺血小鼠的腓腸肌組織切片進(jìn)行CD31免疫組化檢測(cè),發(fā)現(xiàn)注射AGGF1的小鼠血管新生能力明顯好于注射空質(zhì)粒的小鼠(P<0.01)。AGGF1高表達(dá)能促進(jìn)缺血后肢的血管新生。
　　另外,注射AGGF1質(zhì)粒和注射空質(zhì)粒的后肢缺血老鼠的VEGF的表達(dá)量沒(méi)有發(fā)生改變。
　　總而言之,實(shí)驗(yàn)