豬RGS2和Gaq-11基因的克隆、定位及其生物特性研究.pdf

1、脂肪細(xì)胞是由中胚層的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）分化而來，MSC主要分布于脂肪組織和骨髓中，能分化為脂肪細(xì)胞、造骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。目前脂肪細(xì)胞分化的中晚期調(diào)控機(jī)理相對(duì)較清楚，但脂肪細(xì)胞分化早期調(diào)控的分子機(jī)理十分復(fù)雜，且報(bào)道甚少。 G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)子2（RGS2）是動(dòng)物機(jī)體中神經(jīng)、激素及外界信號(hào)刺激轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要信號(hào)分子，它作為G蛋白分子開關(guān)，在廣泛地協(xié)調(diào)胞外刺激應(yīng)答中起著重要的作用。最近的研究表明，RGS2是脂肪細(xì)胞早期分化的重要調(diào)控因

2、子；在對(duì)小鼠皮下前脂肪細(xì)胞分化研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，在所有G蛋白alpha亞基中只有Gaq／11的表達(dá)量顯著減少，提示可能Gaq／11在前脂肪細(xì)胞分化中起重要作用。RGS2直接參與Gaq的作用，因此兩者的協(xié)同作用可能與脂肪細(xì)胞早期分化調(diào)控有關(guān)。 本研究在已知人RGS2、Gaq／11基因序列的基礎(chǔ)上，采用電子克隆和同源序列法相結(jié)合的方法，克隆了豬RGS2、Gaq／11 cDNA（GenBank No：DQ150111，DQ319976、DQ

3、256410）。參考人和鼠RGS2基因序列，在已獲得的cDNA序列上設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增內(nèi)含子，獲得RGS2基因組序列（GenBank No：DQ2856600）。序列分析發(fā)現(xiàn)這三個(gè)基因編碼區(qū)在人、豬之間的同源性很高94-100％，特別是Gaq，在人、獼猴、小鼠、大鼠、南美負(fù)鼠和豬上的氨基酸序列完全相同；RGS2基因結(jié)構(gòu)與人、鼠相同，且內(nèi)含子兩端都符合GT／AG規(guī)則。 采用豬輻射雜種板技術(shù)，對(duì)三個(gè)基因進(jìn)行了染色體精細(xì)定位，分別定位在豬

4、10p、1q21-27和2q21-24。三個(gè)基因所在的豬染色體區(qū)域與基因在人相應(yīng)的染色體位置相一致。 用半定量PCR的方法，對(duì)三個(gè)基因進(jìn)行了組織表達(dá)譜分析。三個(gè)基因在組織中的表達(dá)范圍都很廣泛。RGS2基因在豬的肌肉、肝、心、脾、肺、脂肪組織、腦、子宮組織中均有表達(dá)，在腎、胃和腸中沒有檢測(cè)到表達(dá)，其中在脂肪、肌肉和心等組織中表達(dá)量較高，在脾、肺等組織中表達(dá)量較低。Gaq和Gall基因的表達(dá)在時(shí)空上基本一致，除在腎、肺、胃、腸組織中