仿顱頜面骨再生相關(guān)基因調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、因腫瘤、外傷、放射性骨壞死、骨髓炎、牙周炎或先天疾病等導(dǎo)致的顱頜面骨缺損直接影響口腔頜面部修復(fù)，頜骨缺損修復(fù)時(shí)新骨形成的質(zhì)量、速度和長期穩(wěn)定性與種植義齒修復(fù)息息相關(guān)。多年來，臨床醫(yī)師和研究者們嘗試?yán)米泽w或異體骨移植、人工骨移植、細(xì)胞或/和生長因子介導(dǎo)的組織工程技術(shù)、屏障膜及骨牽張等臨床技術(shù)，在修復(fù)頜骨或牙槽骨缺損方面取得了一定的成效。近年來，骨缺損修復(fù)的理念更傾向于——結(jié)合細(xì)胞及活性分子的骨支架材料植入機(jī)體后能引導(dǎo)及促進(jìn)機(jī)體自身組織的

2、再生修復(fù)，因此，設(shè)計(jì)模仿骨再生生理機(jī)制的骨缺損修復(fù)方案至關(guān)重要。根據(jù)顱頜面膜內(nèi)成骨的特點(diǎn)，我們選擇了在骨缺損修復(fù)初期能促進(jìn)血管再生的堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF），和在骨缺損修復(fù)中后期能調(diào)控其下游信號通路促進(jìn)新骨再生的信號分子Sonic Hedgehog（Shh），目的是通過對這兩種關(guān)鍵因子的調(diào)控，模擬機(jī)體骨缺損修復(fù)過程，探尋理想的促頜骨缺損修復(fù)方案。方法是利用腺相關(guān)病毒高效穩(wěn)定的感染效率及四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)對外源基因的開關(guān)作用，構(gòu)建重

3、組病毒rAAV2-Shh及rAAV2-tet-off-bFGF；將兩種病毒共同感染原代培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；繼而將這種轉(zhuǎn)基因細(xì)胞與β-磷酸三鈣復(fù)合形成可調(diào)控的基因增強(qiáng)型組織工程骨；并通過在四環(huán)素衍生物Dox的調(diào)控下，體外檢測雙因子時(shí)序表達(dá)和三維培養(yǎng)對細(xì)胞生物學(xué)性狀、胞內(nèi)成骨因子水平的影響；最后將這種可調(diào)控的基因增強(qiáng)型組織工程骨移植到大鼠顱骨缺損區(qū)，通過Dox調(diào)控使骨缺損修復(fù)初期bFGF過表達(dá)，中后期以Shh表達(dá)為主，組織學(xué)觀察雙因