FAK沉默對甲狀腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力影響的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的:甲狀腺癌是威脅人們健康的常見頭頸部惡性腫瘤，近年其發(fā)病率有上升趨勢。雖然各種診治措施不斷進(jìn)展，但是甲狀腺癌的遠(yuǎn)期生存率仍然沒有得到明顯的提高，腫瘤細(xì)胞的侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是其治療失敗的主要原因。腫瘤的轉(zhuǎn)移是個復(fù)雜的過程，基本步驟包括腫瘤細(xì)胞侵襲、突破細(xì)胞基質(zhì)，進(jìn)入血液，經(jīng)血流到達(dá)遠(yuǎn)處器官，突破血管進(jìn)入靶器官定居、增殖。
　　 癌細(xì)胞對細(xì)胞外基質(zhì)的黏附性降低是腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移的重要原因之一。研究表明：粘著斑激酶(f

2、ocal adhesion kinase，F(xiàn)AK)作為胞內(nèi)重要的信號分子，介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)的交聯(lián)，在細(xì)胞的移動和侵襲中起關(guān)鍵的作用。FAK在甲狀腺原發(fā)癌及轉(zhuǎn)移癌中均較正常甲狀腺組織表達(dá)增高。因此，如果人為干預(yù)FAK的表達(dá)，有望為甲狀腺癌的治療提供一條新的途徑。
　　 RNA interference(RNAi)具有很強(qiáng)的抑制目的基因作用，較反義寡核苷酸抑制目的基因的效果更強(qiáng)，RNAi被認(rèn)為是繼PCR后又一劃時代的基因工程方

3、法。
　　 本課題利用RNA干擾(RNA interference)沉默F(xiàn)AK表達(dá)研究其對甲狀腺癌SW579細(xì)胞株的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響，為新的治療方法提供依據(jù)。
　　 研究方法:
　　 1.構(gòu)建FAK RNAi慢病毒載體，對體外培養(yǎng)甲狀腺癌SW579細(xì)胞進(jìn)行感染，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。通過報告基因GFP檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染狀態(tài)。
　　 2.MTT法檢測SW579細(xì)胞沉默F(xiàn)AK表達(dá)前后增殖活性的變化。運(yùn)用We

4、sternblot方法鑒定FAK被抑制的情況。
　　 3.制備Transwell小室，檢測沉默F(xiàn)AK基因表達(dá)對SW579細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.成功構(gòu)建了靶向FAK的RNAi慢病毒載體，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SW579細(xì)胞。
　　 2.MTT檢測結(jié)果：繪制生長曲線，可見干擾組細(xì)胞與未處理組及陰性對照組相比，干擾組細(xì)胞存活率明顯減低(P＜0.05)，未處理組及陰性對照組無明顯差別(P＞0.

5、05)。Western blot方法檢測FAK靶向RNAi后，與未處理組及陰性質(zhì)粒對照組相比，干擾組FAK的表達(dá)均明顯降低。
　　 3.體外侵襲與轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)：對比未處理組及陰性對照組細(xì)胞，干擾組細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力明顯下降(P＜0.05)，正常組及陰性對照組細(xì)胞之間無明顯差別(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.成功構(gòu)建FAK的RNAi慢病毒載體能穩(wěn)定感染甲狀腺癌SW579細(xì)胞；
　　 2.FAK RN