2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑地西他濱對SKM-1細胞P15INK4B基因甲基化狀態(tài)的影響
  目的:研究DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑地西他濱(DAC)對骨髓增生異常綜合征(MDS)轉(zhuǎn)白血病細胞株SKM-1 P15INK4B基因甲基化狀態(tài)的影響。
  方法:DAC處理組分為3組,分別以1.5μ mol/L、3.0μmol/L和6.0μmol/L DAC處理SKM-1細胞48h,以未加DAC的SKM-1細胞培養(yǎng)48h作為對照組。甲

2、基化特異性PCR(MSP)檢測各組細胞P15INK4B基因甲基化情況,Real time RT-PCR相對定量法檢測P15INK4B基因mRNA表達情況,羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(CFSE)法檢測細胞增殖抑制情況,碘化丙啶(PI)單染法檢測細胞周期,AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測細胞早期凋亡情況。
  結(jié)果:(1)對照組SKM-1細胞的P15INK4B基因完全甲基化,未出現(xiàn)非甲基化條帶,在1.5μ mol/L、3

3、.0μ mol/L和6.0μ mol/L DAC處理組,P15INK4B基因甲基化條帶逐漸變淺,非甲基化條帶出現(xiàn)并逐步加深;(2)對照組、1.5μ mol/L、3.0μ mol/L和6.0μ mol/L組的P15INK4B基因mRNA表達水平分別為1.00±0.12、0.91±0.13、0.51±0.06和0.43±0.04,與對照組相比,3.0μ mol/L組和6.0μ mol/L組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);DAC處理組兩兩比

4、較,3.0μ mol/L組和6.0μ mol/L組與1.5μ mol/L組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);6.0μmol/L組與3.0μ mol/L組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);(3)對照組、1.5μ mol/L、3.0μ mol/L和6.0μ mol/L組的CFSE平均熒光強度(MFI)分別為51.67±1.61、55.33±2.28、56.33±2.50和55.71±2.87,與對照組相比,3.0μ mol/L組

5、差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),1.5μ mol/L組和6.0μ mol/L組無統(tǒng)計學差異(P>0.05);DAC處理組兩兩比較,差異均無統(tǒng)計學差異(P>0.05);(4)對照組、1.5μ mol/L、3.0μmol/L和6.0μ mol/L組的G1期細胞比例分別為55.78±3.61%、48.12±2.93%、51.69±1.60%和46.71±1.54%,S期細胞比例分別為44.22±3.61%、51.88±2.93%、48.31

6、±1.60%和53.29±1.54%,與對照組相比,1.5μ mol/L組和6.0μmol/L組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),3.0μ mol/L組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);DAC處理組兩兩比較,6.0μ mol/L組與3.0μ mol/L組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其余差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);(5)對照組、1.5μ mol/L、3.0μ mol/L和6.0μ mol/L組的早期凋亡率分別為2.91±

7、0.26%、7.77±0.22%、12.45±0.28%和13.86±0.27%,與對照組相比,DAC處理組差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);DAC處理組兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
  結(jié)論:DAC能逆轉(zhuǎn)SKM-1細胞的P15INK4B基因完全甲基化狀態(tài),在一定程度上抑制SKM-1細胞的增殖,使細胞分化阻滯在S期,并促進細胞凋亡;尚未發(fā)現(xiàn)DAC逆轉(zhuǎn)P15INK4B基因甲基化狀態(tài)的同時使沉默的P15INK4B基

8、因mRNA重新表達。
  第二部分鐵螯合劑去鐵胺對SKM-1細胞P15INK4B基因甲基化狀態(tài)的影響
  目的:研究鐵螯合劑去鐵胺(DFO)對SKM-1細胞P15INK4B基因甲基化狀態(tài)的影響。
  方法;以枸櫞酸鐵銨(FAC)和DFO處理SKM-1細胞,按不同鐵負荷分成3組:對照組、FAC組和FAC+DFO組,分別檢測不同鐵負荷組SKM-1細胞內(nèi)可變鐵池(LIP)、細胞內(nèi)活性氧(ROS)、P15INK4B基因甲基化狀

9、態(tài)、P15INK4B基因mRNA表達情況、細胞增殖抑制情況、細胞周期以及細胞早期凋亡情況。
  結(jié)果:對照組SKM-1細胞的P15INK4B基因完全甲基化,未出現(xiàn)非甲基化條帶;FAC組SKM-1細胞的P15INK4B基因完全甲基化,也未出現(xiàn)非甲基化條帶;FAC+DFO組SKM-1細胞的P15INK4B基因甲基化條帶變淺,并出現(xiàn)非甲基化條帶;與對照組相比,F(xiàn)AC組的LIP(64.04±2.12 vs1.45±0.65)%、ROS(4

10、5.57±1.18 vs33.38±12.96)%明顯升高,CFSE的MFI(23.01±5.20 vs51.67±1.61)%、P15INK4B基因mRNA表達(0.72±0.08 vs1)和細胞早期凋亡率(1.76±0.11 vs2.91±0.25)%明顯減少,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與FAC組相比,F(xiàn)AC+DFO組的LIP(8.34±4.21 vs64.04±2.12)%、ROS(34.39±2.12 vs45.57±

11、1.18)%明顯減少,CFSE的MFI(37.34±6.61 vs23.01±5.20)%、P15INK4B基因mRNA表達(1.50±0.15 vs0.72±0.08)和細胞早期凋亡率(4.77±0.88 vs1.76±0.11)%明顯升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);3組細胞的細胞周期差異無統(tǒng)計學意義。
  結(jié)論:鐵螯合劑DFO可使鐵過載的SKM-1細胞LIP和ROS降低,誘導鐵過載的SKM-1細胞P15INK4B基因

12、去甲基化,使其mRNA重新表達,并可抑制鐵過載的SKM-1細胞增殖,促進其早期凋亡。
  第三部分地西他濱聯(lián)合去鐵胺對SKM-1細胞P15INK4B基因甲基化狀態(tài)的影響
  目的:研究DAC聯(lián)合DFO對SKM-1細胞P15INK4B基因甲基化狀態(tài)的影響。
  方法:以FAC、DFO和DAC處理SKM-1細胞,分成4組:對照組、FAC組、FAC+DFO組和FAC+DFO+DAC組,分別檢測不同處理組SKM-1細胞內(nèi)ROS

13、、P15INK4B基因甲基化狀態(tài)、P15INK4B基因mRNA表達情況、細胞增殖抑制情況、細胞周期以及細胞早期凋亡情況。
  結(jié)果:(1)對照組、FAC組、FAC+DFO組和FAC+DFO+DAC組ROS的MFI分別為33.38±12.96、45.57±1.18、34.39±2.12和36.64±1.96,與FAC組相比,F(xiàn)AC+DFO組和FAC+DFO+DAC組的ROS明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);(2) MSP檢

14、測,對照組和FAC組僅出現(xiàn)M條帶,F(xiàn)AC+DFO組和FAC+DFO+DAC組M條帶變淺,并出現(xiàn)U條帶,P15INK4B基因呈完全甲基化狀態(tài)得到一定程度逆轉(zhuǎn)。(3)對照組、FAC組、FAC+DFO組和FAC+DFO+DAC組SKM-1細胞的P15INK4B基因mRNA相對表達水平分別為1.00±0.12、0.71±0.08、1.49±0.15和1.31±0.13,與FAC組相比,F(xiàn)AC+DFO組和FAC+DFO+DAC組的P15INK4B

15、基因mRNA相對表達水平明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);(4)對照組、FAC組、FAC+DFO組和FAC+DFO+DAC組SKM-1細胞CFSE的MFI分別為51.67±1.61、23.01±5.20、37.34±6.61和39.61±6.92,與FAC組相比,F(xiàn)AC+DFO組和FAC+DFO+DAC組CFSE的MFI增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);(5)對照組、FAC組、FAC+DFO組和FAC+DFO+DAC組S

16、KM-1細胞G1期比例分別為55.78±3.61%、50.2±9.20%、51.10±6.30%和49.58±3.38%,S期比例分別為44.22±3.61%、49.77±9.20%、48.90±6.30%和50.42±3.38%,與FAC組相比,F(xiàn)AC+DFO組和FAC+DFO+DAC組G1期細胞比例有下降,S期細胞比例有升高,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);(6)對照組、FAC組、FAC+DFO組和FAC+DFO+DAC組SKM

17、-1細胞的早期凋亡率分別為2.91±0.25%、1.76±0.11%、4.77±0.88%和8.94±0.87%,與FAC組和FAC+DFO組相比,F(xiàn)AC+DFO+DAC組SKM-1細胞的早期凋亡率均明顯增加,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。TUNEL染色熒光顯微鏡觀察顯示FAC+DFO+DAC組早期凋亡細胞增加。結(jié)論:與單用DFO干預鐵過載的SKM-1細胞相比,聯(lián)用DFO和DAC雙重干預,P15INK4B基因甲基化狀態(tài)和mRNA表

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