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1、目的:研究丙戊酸鈉(VPA)對(duì)人骨髓增生異常綜合征(MDS)細(xì)胞株MUTZ-1細(xì)胞的抑制增殖和凋亡誘導(dǎo)作用,探討藥物作用的可能機(jī)制,并可為臨床MDS的治療提供一定的理論依據(jù)。 方法:采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)VPA對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用;采用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察VPA作用后細(xì)胞形態(tài)的變化;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)不同濃度藥物作用后細(xì)胞凋亡的比例及細(xì)胞周期分布的變化;通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)和
2、Western blot印跡方法分別檢測(cè)藥物作用后p21<'WAF1>(細(xì)胞周期依賴性激酶抑制因子)在mRNA和蛋白質(zhì)水平表達(dá)量的改變。 結(jié)果:VPA對(duì)MUTZ-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。經(jīng)4mmol/L VPA處理MUTZ-1細(xì)胞72h后,細(xì)胞呈現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征:光鏡下可見凋亡細(xì)胞胞體固縮、核固縮、核碎裂及凋亡小體;透射電鏡下可見凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)邊集、胞漿濃縮、密度增加,漿內(nèi)可見大小不規(guī)則的染色質(zhì)團(tuán)塊
3、。流式結(jié)果表明經(jīng)1、2和4mmol/L,VPA作用細(xì)胞72h后,細(xì)胞的凋亡率由處理前的(0.99±0.35)%分別上升為(3.14±0.87)%, (14.90±1.04)%, (22.46±1.74)%,與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05);G<,0>-G<,1>期細(xì)胞比例逐漸增多,S期細(xì)胞比例逐漸減低,細(xì)胞被阻滯在G<,0>-G<,1>期(P<0.05)。RT-PCR和Western blot印跡技術(shù)均發(fā)現(xiàn)VPA作用MUTZ-1細(xì)胞
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