骨髓增生異常綜合征中ZO-1基因甲基化狀態(tài)的研究.pdf

1、骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndrome，MDS)部分異常增生的克隆細胞在疾病演變中細胞周期抑制和細胞分化控制基因失表達，而導致細胞惡變。多種基因啟動子區(qū)CpG島高甲基化導致相應基因沉默，在MDS發(fā)生發(fā)展中起很重要的作用。本室于力等應用RLGS方法篩查出ZO-1基因可能是一個血液系統(tǒng)惡性疾病相關基因。并發(fā)現(xiàn)它的啟動子區(qū)異常甲基化可能是惡性疾病發(fā)生發(fā)展的關鍵機制。ZO-1是膜結合鳥苷酸激酶家族(MAGUK)的成

2、員，在維持正常胞旁屏障通透性及調節(jié)細胞增殖分化中起重要作用，且ZO-1的表達狀況與腫瘤分化及癌演進密切相關。前期研究發(fā)現(xiàn)：在人白血病細胞系HL60中ZO-1基因啟動子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)，該基因表達沉默。提示ZO-1基因與白血病發(fā)生發(fā)展密切相關，可能起到抑癌基因的作用。 本文旨在探討ZO-1基因異常甲基化在骨髓增生異常綜合征(MDS)診斷中作為基因標志的臨床意義。首先，我們以白血病細胞系HL60、一例MDS患者及一例健康人的骨髓原代

3、細胞為研究對象，采用硫化測序的方法進行ZO-1基因啟動子區(qū)CpG位點的甲基化狀況分析。結果顯示：(1)HL60細胞系CpG位點總陽性率為96.74％。(2)健康人原代骨髓細胞CpG位點總陽性率為0.93％。提示健康人ZO-1基因啟動子區(qū)CpG島呈低甲基化狀態(tài)。(3)MDS患者原代骨髓細胞CpG位點的甲基化陽性率為6.51％。說明ZO-1基因CpG島在MDS患者骨髓的惡性細胞中存在異常甲基化現(xiàn)象。(4)健康人與MDS患者原代骨髓細胞的甲基

4、化陽性位點比例的差異具有統(tǒng)計學意義。提示ZO-1基因啟動子區(qū)CpG島的高甲基化狀態(tài)可能是導致MDS發(fā)生的一個重要的因素。 然后，采用甲基化特異性(MS)-PCR方法分析30例健康人、72例血液系統(tǒng)非惡性腫瘤患者及85例MDS患者骨髓標本的ZO-1基因啟動子區(qū)甲基化狀況。結果顯示：(1)ZO-1基因在30例健康人標本中均呈完全非甲基化狀態(tài)。(2)72例血液系統(tǒng)非惡性腫瘤患者骨髓標本中ZO-1基因也呈完全非甲基化狀態(tài)。提示血液系統(tǒng)非

5、惡性腫瘤疾病的發(fā)生與ZO-1的異常甲基化無關。推測ZO-1基因啟動子區(qū)的高甲基化狀態(tài)并不影響機體免疫功能。(3)MDS患者骨髓中ZO-1基因甲基化陽性率(56.5％)明顯高于健康人和血液系統(tǒng)非惡性腫瘤患者，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。(4)MDS各亞類病人骨髓ZO-1基因啟動子區(qū)甲基化陽性率均高于健康人和血液系統(tǒng)非惡性腫瘤患者，其差異也具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。說明ZO-1基因啟動子區(qū)高甲基化在MDS的初始階段就已存在，是M