外源性一氧化碳釋放分子(CORM-2)對膿毒癥早期肝臟炎癥反應和JAK分子磷酸化的抑制作用及分子機制.pdf

1、目的：膿毒癥(Spesis)是指由感染引起的全身性炎癥反應綜合征(SystemicInflammatory Response Syndrome,SIRS),是當前創(chuàng)傷、燒傷外科以及ICU所面臨的棘手難題,其進一步發(fā)展所導致的膿毒性休克(septic shock,SS)、急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)以及多臟器功能不全綜合征(multiple organ dysfun

2、ction syndrome,MODS),已成為臨床主要死亡因為之一。盡管現(xiàn)代外科監(jiān)護技術(shù)和抗生素治療有了很大進展,但膿毒癥的死亡率仍然居高不下,因此膿毒癥及其并發(fā)癥尤其是MODS的防治,仍然是當代外科學領(lǐng)域的難題之一。肝臟作為機體的一個重要器官,在膿毒癥的發(fā)生發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用。有證據(jù)表明:肝臟擁有全身最多數(shù)量的巨噬細胞,負責清除來自腸道、脾臟的細菌和內(nèi)毒素,肝巨噬細胞(Kutter細胞)在膿毒癥時合成和釋放的多種急性時相蛋

3、白和細胞因子,能使多種信號通路活化(包括januskinase/signal transducer andactivator of transcription-JAK/STAT通路)釋放炎癥介質(zhì)且不斷循環(huán)形成“瀑布樣”級聯(lián)反應,在膿毒癥發(fā)生發(fā)展中起重要的作用[1-2]。本研究即采用LPS刺激單核巨噬細胞細胞和小鼠盲腸結(jié)扎和穿孔(cecalligation and puncture,CLP)[3]膿毒癥模型,以外源性CO釋放分子CORM-

4、2進行早期干預,觀察它對JAKs分子磷酸化的抑制作用,旨在研究其對膿毒癥JAK/STAT通路的活化是否具有調(diào)節(jié)作用,并探討可能的分子機制。
　　 方法：研究分為2部分,第一部分,利用LPS刺激單核巨噬細胞(RAW264.7),建立細胞膿毒癥模型作為膿毒癥小鼠的肝臟離體模型,在離體方面研究炎癥反應的機制以及外源性一氧化碳釋放分子(CORM-2)所釋放的CO對該模型的干預作用；第二部分,應用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)的C57BL/6小鼠

5、復制膿毒癥的在體模型,將小鼠隨機分為4組(具體例數(shù)根據(jù)檢測指標而定):假手術(shù)組(sham)、CLP組、CLP+iCORM組、CLP+CORM-2組,以肝臟的形態(tài)學、功能、細胞因子以及JAK/STAT表達水平為指標探討CLP小鼠早期肝臟炎癥反應的部分分子機制,評價了外源性一氧化碳釋放分子(CORM-2)所釋放的CO對CLP小鼠早期肝臟炎癥反應的抑制作用。
　　 結(jié)果：⑴單核巨噬細胞炎癥模型:LPS刺激后細胞損傷明顯,活性下降；炎癥

6、因子IL-1β、TNF-α相關(guān)炎性蛋白表達明顯增加,JAK/STAT活性也顯著增高。外源性CO的干預組炎癥的反應較對照組明顯減輕,說明外源性CO能在一定程度抑制小鼠膿毒癥離體模型的炎癥反應。⑵CLP小鼠膿毒癥模型:術(shù)后24h小鼠肝臟炎癥細胞浸潤明顯,血漿中IL-1β、TNF-α等指標明顯上升,ICAM-1、JAK/STAT蛋白表達明顯增加。外源性CO的直接干預可以明顯改善肝臟組織腫脹程度,減少驗證細胞的浸潤,抑制炎性反應,有效維護細胞功