大腸癌淋巴管新生與局部浸潤和淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf

1、大腸癌是人類最常見的惡性腫瘤之一。目前，大腸癌的治療以手術(shù)為主，其他治療為輔的原則，盡管近十幾年來，術(shù)后生存率有所提高，但不十分明顯，仍舊徘徊在50％(直腸癌)和70％(結(jié)腸癌)左右。除了需要提高早診率、進(jìn)一步改善治療手段外，我們需要深入地了解大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的規(guī)律和機(jī)制，對大腸癌病人的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否要有準(zhǔn)確的判斷，因?yàn)楹笳哧P(guān)系到手術(shù)方式的選擇和術(shù)后治療方案的制定。然而，現(xiàn)行的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分期(N分期)僅僅涉及了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否及其絕對數(shù)目

2、，忽視了其他淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)參數(shù)，如轉(zhuǎn)移度、轉(zhuǎn)移范圍、跳躍式轉(zhuǎn)移等，而這些因素有可能影響病人的預(yù)后。因此，需要我們充分了解大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的各種參數(shù)的規(guī)律及其臨床意義。 越來越多證據(jù)表明，大腸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的原因之一是隱匿在淋巴系統(tǒng)中的腫瘤細(xì)胞，他們獲得了逃逸機(jī)體免疫監(jiān)視、抵御免疫細(xì)胞和因子攻擊的能力，常規(guī)的手術(shù)切除“鞭長莫及”，化療則難以在淋巴系統(tǒng)中長時(shí)間維持具有細(xì)胞毒性的藥物濃度，給治療帶來困難，這可能可以部分解釋淋巴結(jié)

3、轉(zhuǎn)移病人預(yù)后較差的原因。因此，需要尋找新的針對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療手段，才可能提高這部分病人的生存率。而確實(shí)有效的治療手段的發(fā)現(xiàn)需要對大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制有較透徹的了解。 近年來，隨著組織胚胎學(xué)的發(fā)展，淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，為淋巴管的研究提供了有利的條件。通過研究，許多學(xué)者證明了腫瘤組織內(nèi)部和瘤周組織存在新生淋巴管結(jié)構(gòu)，可能是腫瘤細(xì)胞侵入淋巴系統(tǒng)的通道。迄今已在多種人類腫瘤包括大腸癌中觀察到了淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物VEGF

4、-C、VEGF-D和VEGFR-3表達(dá)。有研究表明，它們在癌組織/癌旁組織的表達(dá)和淋巴管密度均與惡性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，是影響許多惡性腫瘤病人預(yù)后的因素?？梢?，腫瘤新生淋巴管的研究有希望揭示腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的機(jī)制，從而為淋巴靶向治療手段的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。 因此，本課題從臨床和基礎(chǔ)兩方面分別研究大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移規(guī)律及其臨床意義和探討腫瘤新生淋巴管在大腸癌淋巴道轉(zhuǎn)移中的可能機(jī)制。課題內(nèi)容包括以下四個(gè)部分： 第1章：實(shí)驗(yàn)方法——

5、實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)時(shí)定量PCR是一種新的核酸定量技術(shù)。它在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上運(yùn)用熒光能量傳遞技術(shù)，加入熒光標(biāo)記，巧妙地把核酸擴(kuò)增(PCR)、雜交、光譜分析和實(shí)時(shí)檢測技術(shù)結(jié)合在一起，借助于熒光信號來檢測PCR產(chǎn)物。目前，實(shí)時(shí)PCR技術(shù)檢測擴(kuò)增過程的技術(shù)包括非特異性雙鏈DNA染色和特異性探針雜交系統(tǒng)。它的優(yōu)點(diǎn)包括特異性、敏感性進(jìn)一步提高，操作簡便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，能有效避免污染及減少對人體的危害，減少工作量，更為重要的是它能精確定量，減少了系統(tǒng)

6、偏倚，其結(jié)果說服力強(qiáng)。已被應(yīng)用于病原體測定、免疫分析、腫瘤基因檢測、基因表達(dá)、突變和多態(tài)性研究等多個(gè)領(lǐng)域。在腫瘤的定量研究中，可用于檢測腫瘤細(xì)胞、進(jìn)行癌基因定量、最小殘留疾病研究以及判斷療效和預(yù)后等。 本研究使用的實(shí)時(shí)定量PCR檢測系統(tǒng)為澳大利亞產(chǎn)的Rotor-gene2000，原理采用非特異性雙鏈DNA染色。 第2章：大腸癌VEGFR-3與Prox1的相關(guān)性研究目的：探討VEGFR-3和Prox1在大腸癌組織、正常黏膜

7、組織和淋巴結(jié)中的表達(dá)及其相互關(guān)系。 方法：采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測63份直腸癌腫瘤遠(yuǎn)端腸壁組織，156顆系膜淋巴結(jié)，各13份腫瘤組織和鄰近正常黏膜組織中VEGFR-3、Proxl的mRNA含量。 結(jié)論：VEGFR-3與Proxl的表達(dá)在正常腸壁組織和系膜淋巴結(jié)中存在相關(guān)性，提示兩者在新生淋巴管形成過程中可能有協(xié)同作用，并且在正常組織中是淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞良好的標(biāo)記物。但在腫瘤組織中兩者沒有相關(guān)性，提示新生淋巴管

8、在腫瘤組織內(nèi)部和瘤周組織中的特征和作用機(jī)制不完全相同。 第3章：直腸癌淋巴管新生與腫瘤遠(yuǎn)端浸潤的相關(guān)性研究目的：探討直腸癌遠(yuǎn)端腸管組織新生淋巴管的長度及其對手術(shù)切除腸管范圍的影響。 材料和方法：從10例直腸癌病人的手術(shù)切除標(biāo)本中自腫瘤遠(yuǎn)端開始每隔0.5cm依次連續(xù)切取正常腸壁組織共63份，平均每例6.3份。運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測VEGFR-3和Proxl的表達(dá)量。 結(jié)果：所有組織均表達(dá)VEGFR-3和Pro

9、xl。9例病人的VEGFR-3表達(dá)量和10例病人的Proxl表達(dá)量自近及遠(yuǎn)存在依次遞減的趨勢，大多數(shù)病例的VEGFR-3和Proxl表達(dá)量于癌旁1.5cm內(nèi)出現(xiàn)明顯落差。癌旁1.5cm內(nèi)組織VEGFR-3表達(dá)量中位數(shù)高于癌旁＞1.5cm組織(P=0.024)。癌旁1.0cm內(nèi)組織Proxl表達(dá)量中位數(shù)高于癌旁＞1.0cm組織(P=0.003)。 結(jié)論：新生的淋巴管可能為腫瘤細(xì)胞提供了轉(zhuǎn)移的通道，成為他們侵入淋巴系統(tǒng)進(jìn)行遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的

10、橋梁。直腸癌遠(yuǎn)端腸管組織的新生淋巴管長度不超過3cm，大多數(shù)在1.5cm內(nèi)，外科切除3cm遠(yuǎn)端腸管足以保證切除所有的新生淋巴管。 第4章：大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與淋巴管新生的相關(guān)性研究 一、臨床部分大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移規(guī)律的臨床意義目的：探討大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的規(guī)律及其與預(yù)后的關(guān)系。 方法：對1990年1月至1999年12月間有完整病理學(xué)檢查和隨訪資料的1051例根治性切除的大腸癌病例進(jìn)行回顧性分析。分析淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、轉(zhuǎn)移度

11、與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。評價(jià)淋巴結(jié)活檢數(shù)目、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移度、轉(zhuǎn)移范圍和跳躍式轉(zhuǎn)移對預(yù)后的影響。 結(jié)果：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和轉(zhuǎn)移度與性別、病程、腫瘤大小、多原發(fā)癌、合并腸息肉無關(guān)，與年齡、無癥狀呈負(fù)相關(guān)，與腫瘤部位、T分期、病理分級、大體類型、組織類型呈正相關(guān)。陽性家族史病例的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和轉(zhuǎn)移度較低。淋巴結(jié)活檢數(shù)目、轉(zhuǎn)移度和轉(zhuǎn)移范圍都是影響預(yù)后的因素。 結(jié)論：年齡越小、侵襲越深、分化越差、直腸癌、陽性家族史病例越容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

12、移。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的臨床指標(biāo)能夠影響預(yù)后。 二、基礎(chǔ)部分大腸癌系膜淋巴結(jié)VEGFR-3和Proxl的表達(dá)與轉(zhuǎn)移的關(guān)系目的：研究大腸癌系膜淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與淋巴結(jié)內(nèi)部淋巴管新生的相關(guān)性，探索新生淋巴管在腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程中所起的作用。 材料和方法：運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測來自20例大腸癌病人手術(shù)切除標(biāo)本的156枚系膜淋巴結(jié)的VEGFR-3和Proxl的表達(dá)情況。并運(yùn)用傳統(tǒng)RT-PCR法定性檢測其中10例病人系膜淋巴結(jié)的CEA

13、、CK-20、GCC的表達(dá)，了解微轉(zhuǎn)移情況。比較病理組織學(xué)檢查提示的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和VEGFR-3/Proxl的表達(dá)情況；分析淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與VEGFR-3/Proxl表達(dá)的關(guān)系。 結(jié)果：每例病人的陽性淋巴結(jié)組VEGFR-3和Proxl的表達(dá)量都比陰性淋巴結(jié)組低，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。10例病人中所發(fā)現(xiàn)的9枚微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的VEGFR-3/Prox1表達(dá)量介于病理檢查陽性和陰性淋巴結(jié)組VEGFR-3/Proxl表達(dá)量之間。

14、 結(jié)論：陽性淋巴結(jié)(包括病理形態(tài)學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷為微轉(zhuǎn)移)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物VEGFR-3和Proxl的表達(dá)均低于陰性淋巴結(jié)。新生淋巴管在腫瘤細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的機(jī)制具有復(fù)雜的多種因子參與的特點(diǎn)，需要進(jìn)一步深入的研究。 總結(jié)：1.VEGFR-3與Proxl的表達(dá)在正常腸壁組織和系膜淋巴結(jié)中存在相關(guān)性，提示兩者在新生淋巴管形成過程中可能有協(xié)同作用，是淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞良好的標(biāo)記物。但在腫瘤組織中兩者沒有相關(guān)性，提示新生淋巴

15、管在腫瘤組織內(nèi)部和瘤周組織中的特點(diǎn)和作用機(jī)制不完全相同。 2.新生的淋巴管可能為腫瘤細(xì)胞提供了轉(zhuǎn)移的通道，成為他們侵入淋巴系統(tǒng)進(jìn)行遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的橋梁。直腸癌遠(yuǎn)端腸管組織的新生淋巴管長度不超過3cm，大多數(shù)在1.5cm內(nèi)，外科切除3cm遠(yuǎn)端腸管足以保證切除所有的新生淋巴管。 3.年齡越小、侵襲越深、分化越差、直腸癌、陽性家族史病例越容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)活檢數(shù)目、轉(zhuǎn)移度和轉(zhuǎn)移范圍都是影響預(yù)后的因素。 4.陽性淋巴結(jié)

16、(包括病理形態(tài)學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷為微轉(zhuǎn)移)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物VEGFR-3和Proxl的表達(dá)均低于陰性淋巴結(jié)。提示新生淋巴管在腫瘤細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移機(jī)制中作用的復(fù)雜性。 創(chuàng)新性：1.實(shí)驗(yàn)證明VEGFR-3和Proxl在正常組織中的表達(dá)具有相關(guān)性，在腫瘤組織中沒有相關(guān)性。國內(nèi)外文獻(xiàn)未見相關(guān)報(bào)道。 2.檢測直腸癌遠(yuǎn)端腸壁的VEGFR-3和Proxl的表達(dá)，提出直腸遠(yuǎn)端“新生淋巴管分子定界”的概念并探討其臨床意義。國內(nèi)外文

17、獻(xiàn)未見相關(guān)報(bào)道。 3.提出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素，并建立數(shù)學(xué)模型；比較大腸癌淋巴結(jié)跳躍式轉(zhuǎn)移與非跳躍式轉(zhuǎn)移的預(yù)后差異。國內(nèi)外文獻(xiàn)未見相關(guān)報(bào)道。 4.檢測惡性腫瘤淋巴結(jié)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)陽性淋巴結(jié)(包括病理形態(tài)學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷為微轉(zhuǎn)移)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物VEGFR-3和Proxl的表達(dá)均低于陰性淋巴結(jié)。國內(nèi)外文獻(xiàn)未見相關(guān)報(bào)道。 展望：新生淋巴管是近年來受到醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的活躍的研究領(lǐng)域。它