白藜蘆醇對Pristane誘導(dǎo)兒狼瘡鼠B淋巴細(xì)胞作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡是典型的自身免疫性疾病，以T、B細(xì)胞的高反應(yīng)性、自身抗體的出現(xiàn)、免疫復(fù)合物的沉積和多系統(tǒng)器官組織的損害為特征，目前尚無完全令人滿意的治療SLE的藥物。以往認(rèn)為T淋巴細(xì)胞異?；罨癁镾LE的主要發(fā)病機(jī)制，而今B淋巴細(xì)胞在SLE中的地位變得越來越重要?；蚯贸骃irt1-/-能出現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡樣表現(xiàn)，提示SIRT1有望成為SLE預(yù)防和治療的靶點(diǎn)。而白藜蘆醇(Resveratrol，Resv)為SIR

2、T1的激動劑，且具有調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的作用。本課題組的前期研究結(jié)果顯示，Resv對Pristane誘導(dǎo)小鼠發(fā)生狼瘡具有預(yù)防作用，并能抑制狼瘡鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞的活化、增殖、誘導(dǎo)其凋亡。而目前尚無Resv對SLE及狼瘡模型B淋巴細(xì)胞作用的相關(guān)報(bào)道。
　　 研究目的:
　　 體內(nèi)觀察Resv對狼瘡鼠模型B淋巴細(xì)胞的影響;體外研究Resv對狼瘡鼠B淋巴細(xì)胞活化、增殖、凋亡、分化和功能的影響，并探討其可能機(jī)制，為Resv應(yīng)用于

3、治療SLE的前景提供新的依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.將BALB/e鼠隨機(jī)分成正常對照組、模型對照組、Resv組三組，每組10只，觀察期為7月。應(yīng)用ELISA法檢測血清Ig各亞型和自身抗體，免疫熒光法檢測免疫球蛋白IgG、IgM的沉積。
　　 2.分離Pristane誘導(dǎo)狼瘡鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞(SMC)，磁珠分選法分離CD19+B淋巴細(xì)胞，SMC或B細(xì)胞用不同濃度Resv干預(yù)后，用流式細(xì)胞術(shù)分析其CD69、CD8

4、0、CD86的表達(dá);B細(xì)胞CFSE染色后用不同濃度Resv干預(yù)后，流式細(xì)胞術(shù)分析其增殖情況;B細(xì)胞用不同濃度Resv干預(yù)后，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡;SMC或B細(xì)胞用不同濃度Resv干預(yù)后，用流式細(xì)胞術(shù)分析其分化情況，應(yīng)用Real-time PCR檢測Blimp-1基因mRNA的表達(dá);SMC或B細(xì)胞用不同濃度Resv干預(yù)后，應(yīng)用ELISA檢測培養(yǎng)上清中的Ig各亞型的相對濃度，應(yīng)用CBA法檢測上清中細(xì)胞因子水平。
　　 結(jié)果:

5、>　　 1.正常對照組與Resv組IgG在腎臟的沉積均明顯弱于模型對照組;正常對照組IgM的沉積明顯低于模型對照組，Resv組IgM的沉積存在減弱的趨勢;正常對照組血清IgG1、IgG2a、IgG3、IgM、IgA明顯低于模型對照組;Resv組血清IgG1、IgG2a、IgG3明顯低于模型對照組;正常對照組血清ANA、抗ds-DNA抗體、抗ss-DNA抗體明顯低于模型對照組;抗nRNP/Sm抗體模型對照組與正常對照組相比存在升高的趨勢

6、;Resv組血清ANA、抗ds-DNA抗體、抗RNP/Sm抗體雖比模型對照組下降，但并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.Resv體外可抑制由LPS或抗CD40抗體引起的B細(xì)胞CD69、CD80、CD86的表達(dá)，且呈劑量依賴性;Resv可抑制由LPS引起的B細(xì)胞的增殖，且呈劑量依賴性;而Resv對B細(xì)胞的凋亡無影響;Resv可抑制由LPS或抗CD40抗體引起的SMC或B細(xì)胞CD138+漿細(xì)胞的分化，且呈劑量依賴性;Resv可使B細(xì)胞Bli

7、mp-1 mRNA表達(dá)水平顯著下降;Resv可抑制B細(xì)胞的IgG1、IgG2a、IgG3、IgM、IgA的分泌，且呈現(xiàn)劑量依賴性;Resvl0μM能促進(jìn)B細(xì)胞IL-10的分泌;而Resv40μM抑制IL-10的分泌;Resv可抑制IL-6的分泌;Resv可使培養(yǎng)上清的IFN-γ/IL-4比例顯著下降。
　　 結(jié)論:
　　 pristane誘導(dǎo)狼瘡鼠存在B淋巴細(xì)胞的高反應(yīng)性;白藜蘆醇體內(nèi)體外均可調(diào)控B淋巴細(xì)胞的功能;白藜蘆