法舒地爾對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)足細(xì)胞骨架重構(gòu)的干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　　觀察ROCK抑制劑法舒地爾對(duì)血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)誘導(dǎo)小鼠足細(xì)胞骨架重構(gòu)的影響，并進(jìn)一步探討法舒地爾在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)足細(xì)胞骨架重構(gòu)病變中的保護(hù)機(jī)制。
　　方法：
　　免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定SV40T轉(zhuǎn)染的條件永生型小鼠足細(xì)胞株。將不同濃度(10-9-10-6 mol/L)AngⅡ處理足細(xì)胞24h、10-7mol/L AngⅡ以不同時(shí)間(6-36h)作用足細(xì)胞，觀察足細(xì)胞Synap

2、topodin表達(dá)的變化。本實(shí)驗(yàn)體外采用10-7mol/L AngⅡ作用足細(xì)胞24h致骨架重構(gòu)的損傷模型。實(shí)驗(yàn)分為3組：對(duì)照組、AngⅡ刺激組、法舒地爾干預(yù)組。對(duì)照組：用RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)足細(xì)胞；AngⅡ刺激組：采用10-7mol/L AngⅡ干預(yù)足細(xì)胞24h；法舒地爾干預(yù)組：10-6mol/L mol/L法舒地爾預(yù)孵育不同時(shí)間和不同濃度(10-8-10-6 mol/L)法舒地爾預(yù)孵育30 min后，再加入含10-7 mol/L

3、 AngⅡ的培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育24h。FITC-鬼筆環(huán)肽熒光染色分析足細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白F-actin結(jié)構(gòu)分布變化；Western Blot檢測(cè)足細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白Synaptopodin表達(dá)變化。進(jìn)一步觀察細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)骨架裝配的Rho/ROCK信號(hào)通路的活性，即采用Western Blot檢測(cè)Rho激酶I(ROCKI)及磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶點(diǎn)亞單位1(MYPT1)表達(dá)，代表ROCK的表達(dá)及活性。
　　結(jié)果：
　　AngⅡ以劑量

4、依賴和時(shí)間依賴方式下調(diào)足細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白Synaptopodin的表達(dá)。AngⅡ使足細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白F-actin結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，F(xiàn)-actin由交聯(lián)高度有序地平行聚集成束貫穿于細(xì)胞全長(zhǎng)，沿細(xì)胞呈極性分布解體以松散的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)互相結(jié)合，足細(xì)胞失去原有的細(xì)胞張力。而法舒地爾預(yù)處理可減輕AngⅡ介導(dǎo)的Synaptopodin的表達(dá)下調(diào)(P<0.05)，法舒地爾預(yù)處理可減輕F-actin的重構(gòu)。法舒地爾預(yù)處理可下調(diào) AngⅡ誘導(dǎo)的足細(xì)胞Rho激酶