來(lái)源于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和造血干細(xì)胞的成骨細(xì)胞性質(zhì)的研究.pdf

1、目的 1 來(lái)源于骨髓的間充質(zhì)干細(xì)胞可以向成骨細(xì)胞定向分化,檢測(cè)在體外分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)后細(xì)胞的性質(zhì),探討不同誘導(dǎo)時(shí)間后細(xì)胞的性質(zhì)并與來(lái)源于正常人松質(zhì)骨成骨細(xì)胞進(jìn)行比較.2 骨髓中含有造血和間充質(zhì)兩種干細(xì)胞系統(tǒng),探討骨髓中兩種干細(xì)胞功能的交叉性.方法 1采用Ficoll分離骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞,體外擴(kuò)增,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原的表達(dá).在DMEM/F12培養(yǎng)基中加入地塞米松、β-磷酸甘油、抗壞血酸(稱為OS培養(yǎng)基)定向誘導(dǎo)MS

2、C分化為成骨細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài),用堿性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型膠原、骨鈣素(OCN)染色來(lái)鑒定成骨細(xì)胞功能,同時(shí)用不同濃度的BMP-2和DEX刺激細(xì)胞來(lái)觀察誘導(dǎo)7天、14天的成骨細(xì)胞的性質(zhì)并和來(lái)源于人松質(zhì)骨的成骨細(xì)胞進(jìn)行比較.2 采用MACS CD34+細(xì)胞分離系統(tǒng)分離骨髓,流式細(xì)胞儀檢測(cè)分離骨髓CD34+的純度.分離純化的CD34+細(xì)胞在OS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)并進(jìn)行成骨細(xì)胞功能鑒定.結(jié)果 1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果,體外分離的MSC可表達(dá)CD

3、29、CD105,弱表達(dá)Stro-1,不表達(dá)CD34.誘導(dǎo)培養(yǎng)后細(xì)胞形態(tài)由纖維狀變成多角形,ALP、Ⅰ型膠原、骨鈣素染色呈陽(yáng)性.體外誘導(dǎo)分化14天的成骨樣細(xì)胞比誘導(dǎo)7天的細(xì)胞更加成熟,但其成骨能力比正常的成骨細(xì)胞成骨能力要弱.2 MACS分離系統(tǒng)分離骨髓CD34+細(xì)胞后純度達(dá)95％,分離效果較好,CD34+細(xì)胞直接培養(yǎng)可獲得貼壁細(xì)胞.但CD34+細(xì)胞體外擴(kuò)增潛能較小.CD34+細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)7天后可以檢測(cè)到成骨細(xì)胞的標(biāo)志即ALP、Ⅰ型膠原