抗白菊與TRAIL基因聯(lián)合應用對大腸癌細胞株DLD1作用的實驗研究.pdf

1、浙江大學碩士學位論文抗白菊與TRAIL基因聯(lián)合應用對大腸癌細胞株DLD1作用的實驗研究姓名：張磊申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：何超20040501浙江大學醫(yī)學院碩士學住論文因治療中有廣泛的應用前景。本實驗聯(lián)合應用杭白菊提取液和端粒酶(hTERT)啟動子驅(qū)動下腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體基因，作用于人大腸癌細胞株DLD1，體外觀察聯(lián)合應用對腫瘤細胞的捅亡誘導及殺傷作用，來探索傳統(tǒng)中藥與現(xiàn)代基因治療聯(lián)合應用治療腫瘤的新途徑。材料

2、與方法實驗材料細胞系：人胚腎細胞株293細胞，大腸癌細胞株DLDI：腺病毒載體：Ad／hTERTgTRAIL，Ad／CMV—GFP(載體對照)；其它：細胞培養(yǎng)材料，各種實驗試劑、耗材和儀器等。實驗方法1)病毒擴增、純化、鑒定和滴度測定：重組腺病毒Ad／hTERT—gTRAIL及Ad，CMV—GFPMOI100感染人胚腎細胞株293細胞，當細胞病變明顯時，收集細胞，反復凍融三次后，用CsCI超速梯度離心法純化，分光光度儀在260nm處測O

3、D值換算得病毒滴度。2)轉(zhuǎn)基因表達檢測：將1X105個DLDl細胞接種于六孔板每孔，接種24小時后以MOI500分別感染Ad／hTERT—gTRAIL、Ad／cMV—GFP(陽性對照)、各濃度杭白菊提取液(375u∥ul、75ug／ul、15u∥ul、30u∥ul共4組)與500MOI的Ad／hTERT—gTRAIL混合組、各濃度杭白菊提取液(375u∥ul、75u∥ul、15u#ul、30u∥ul共4組)與500MOI的A彤CMV—G