廣西6株狂犬病分離毒株P和M基因的克隆和序列分析.pdf

1、為了探討廣西狂犬病病毒在分子水平上的變異規(guī)律，本試驗應用RT-PCR技術，通過NSM1/NSM2引物，對6個廣西毒株GXNN2、GXPL、GXPXD、GXQZD、GXYZD和GXNND的P和M基因進行擴增、克隆和測序。將克隆的P和M基因ORF的核苷酸及其推導的氨基酸序列，與本實驗室已測定的23株及國內外公開發(fā)表的16株狂犬病病毒相應序列進行同源性和遺傳進化樹分析。結果顯示，不管基于P基因還是M基因，進化樹分析表明，廣西狂犬病分離毒株都可

2、分為3個群：Ⅰ群、Ⅱ群、Ⅲ群。Ⅰ群包括GXHX82、GXHXB、GXLC9、GXQZD、GX08、GXNND、GXHX、GX014，GX195，GXLB，GXSL、GXWXp，GX260，GX01，GX09、GX091和GXLA共17株，Ⅱ群包括GXLCC、GXPL、GXYZD、GXBM、GX219、GX304、GXLA11、GXNN2、GX074、GXPX和GXPXD共11株，Ⅲ群僅有GXN119株。本次克隆的6個毒株中，GXQZD和

3、GXNND株屬于Ⅰ群，GXPL、GXYZD、GXNN2和GXPXD屬于Ⅱ群。 同源性分析表明，本次克隆的6個毒株P基因編碼區(qū)核苷酸及其推導的氨基酸序列同源性分別在85.8％-99.6％和91.2％-99.7％之間；M基因的分別在89.7％-100％和96％-100％之間。此6株與之前測序的23個廣西毒株 P 基因編碼區(qū)核苷酸及其推導的氨基酸序列同源性分別在85％-100％和90.2％-100％之間，M基因的分別在88.5％-10

4、0％和95.5％-100％之間。 比較的P基因和M基因的氨基酸特異位點，結果發(fā)現(xiàn)，廣西毒株P基因氨基酸第69、70、130和131位屬于Ⅰ群毒株特異性位點；第134、135、140和151位為Ⅱ群毒株特異性位點；第73、162、167、174、240、253和281位為Ⅲ群特異性位點；第90位為廣西Ⅰ、Ⅱ群共有的特異性位點；第57，63和241位屬于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群毒株共有的特異性位點；廣西毒株M基因氨基酸第17和20位屬于Ⅱ群毒株