血紅素加氧酶-1基因啟動(dòng)子多態(tài)性與中國(guó)漢族人群食管鱗癌關(guān)系的研究.pdf

1、食管癌是世界六大惡性腫瘤之一，我國(guó)是食管癌高發(fā)區(qū)域，且90％是食管鱗狀細(xì)胞癌（Esophageal Squamous Cell Carcinoma，ESCC），發(fā)病和死亡人數(shù)均超過(guò)世界平均水平，位居世界首位，臨床上多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)多已是中晚期，總體治療效果并不理想，預(yù)后往往較差，可見(jiàn)其對(duì)人體的危害程度已不容忽視，所以早期診斷、早期治療對(duì)食管癌的治療非常重要，所以尋找切之有效的高特異性腫瘤篩選指標(biāo)和干預(yù)靶點(diǎn)，并能較好的應(yīng)用到臨床治療上已是當(dāng)務(wù)

2、之急。
　　血紅素加氧酶-1(heme oxygenase，HO-1)是體內(nèi)降解血紅素重要的限速酶，是近年來(lái)被公認(rèn)的一種重要的抗氧化劑及組織保護(hù)酶，在人體內(nèi)催化血紅素，使其降解并且釋放出Fe2+、膽綠素和CO，這三大產(chǎn)物均可在細(xì)胞中發(fā)揮不同程度的抗炎、抗氧化壓力、抗凋亡等作用。課題的前期研究結(jié)果表明，HO-1與食管癌的分化程度、浸潤(rùn)程度、淋巴轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為顯著相關(guān)此外，已有相關(guān)的遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，HO-1基因5'端啟動(dòng)子區(qū)域(GT

3、)n多態(tài)性可能在某些相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)控制功能，被認(rèn)為是人體潛在的功能性多態(tài)性位點(diǎn)之一。既往研究表明HO-1啟動(dòng)子區(qū)域的基因多態(tài)性與惡性黑色素瘤、肺腺癌、口腔鱗癌等疾病的易感性具有相關(guān)性，但目前國(guó)內(nèi)對(duì)HO-1基因啟動(dòng)子多態(tài)性與食管鱗癌相關(guān)關(guān)系的研究報(bào)道較為少見(jiàn)。
　　目的:
　　分析人血紅素加氧酶-1基因啟動(dòng)子區(qū)(GT)n微衛(wèi)星多態(tài)性與漢族人群患食管鱗狀細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)大小及其與相關(guān)臨床病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)性，從而

4、探討HO-1基因啟動(dòng)子區(qū)(GT)n多態(tài)性與食管鱗癌的關(guān)系，構(gòu)建相應(yīng)的啟動(dòng)子螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒，分析不同長(zhǎng)度的(GT)n與其啟動(dòng)子活性的相關(guān)性，為HO-1基因及其多態(tài)性可能作為食管癌的基因治療靶點(diǎn)和臨床腫瘤篩選指標(biāo)進(jìn)一步提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　方法:
　　選取2011年1月至2013年12月期間年齡在40-79歲的126名食管鱗癌患者為病例組，男性83名，女性43名，平均年齡（61±8）歲;選擇同期健康體檢人群134名為對(duì)照組，男性

5、77名，女性57名，平均年齡(57+10)歲，對(duì)兩組的血液標(biāo)本應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增(GT)n特定片段，并進(jìn)行基因測(cè)序，根據(jù)(GT)n的重復(fù)次數(shù)把其相應(yīng)分為S(n＜25)、M(25≤n＜30)、L(n≥30)3類等位基因，統(tǒng)計(jì)它們的頻率分布情況，評(píng)價(jià)多態(tài)性與食管鱗癌及臨床病理數(shù)據(jù)的關(guān)系。構(gòu)建相應(yīng)的啟動(dòng)子螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染食管鱗癌細(xì)胞株Eca109，檢測(cè)相對(duì)螢光素酶活性比值，分析不同長(zhǎng)度的(GT)n與其啟動(dòng)子活性情況。
　　結(jié)果:<

6、br>　　1.食管鱗癌組和對(duì)照組的HO-1基因啟動(dòng)子區(qū)(GT)n的重復(fù)次數(shù)都在16到36次之間分布，在23次和30次有兩個(gè)高峰，兩組的(GT)n微衛(wèi)星多態(tài)性等位基因頻率分布基本一致。
　　2.食管鱗癌組較對(duì)照組擁有高的L型等位基因頻率(25.8％ vs14.9％，x2=9.520,p=0.002)及L型等位基因（L/L，L/M，L/S）攜帶率(41.3％ vs27.6％，x2=5.381，P=0.020)。
　　3.相比較非

7、L型等位基因攜帶組，L型等位基因攜帶組有較高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率(63.5％ vs41.8％，x2=5.685，p=0.017)和低分化鱗癌細(xì)胞檢出率(53.8％ vs28.4％,x2=8.335,P=0.004)。
　　4.轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，在H2O2處理組中，轉(zhuǎn)染攜帶(GT)16重組報(bào)告質(zhì)粒的Eca109細(xì)胞，相對(duì)螢光素酶活性增加(F*=23.615,p*=0.008);在對(duì)照組中，相比(GT)26和(GT)36，轉(zhuǎn)染攜帶(GT)16重組