包載反義RNA重組腺病毒微球的制備及逆轉(zhuǎn)肝細(xì)胞癌MRP的研究.pdf

1、目的:構(gòu)建攜帶反義多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)基因的重組腺病毒微球并轉(zhuǎn)染人肝癌耐藥細(xì)胞株,并進(jìn)行肝動(dòng)脈栓塞治療,了解包載反義RNA重組腺病毒微球逆轉(zhuǎn)肝細(xì)胞癌MRP的治療效果,為高分子化學(xué)與基因治療的結(jié)合提供臨床應(yīng)用的理論基礎(chǔ).方法:采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA)包被攜帶反義MRP基因的重組腺病毒制成微球,體外測(cè)定微球的粒徑、載病毒量、包封率及釋放規(guī)律,并用其轉(zhuǎn)染人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG<,2>/ADM,48h及120h后

2、檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光強(qiáng)度.MTT法檢測(cè)耐藥細(xì)胞的阿霉素半數(shù)致死量(IC<,50>);流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)紅色熒光強(qiáng)度,以熒光指數(shù)FI代表DNR濃度;以β-actin為內(nèi)參照,以RT-PCR法觀察轉(zhuǎn)染48h及120h后耐藥細(xì)胞MRPmRNA的表達(dá)量高低,比較MRP的逆轉(zhuǎn)情況及反義基因表達(dá)的特異性及作用的時(shí)效關(guān)系.設(shè)不做任何處理組,生理鹽水組,空白微球組,攜帶反義MRP的重組腺病毒組為對(duì)照,觀察經(jīng)肝動(dòng)脈注射rAdV微球的靶向性效果:動(dòng)態(tài)測(cè)定rA

3、dV微球在肝癌組織及癌旁組織,腎肺組織內(nèi)的分布,觀測(cè)腫瘤體積大小、腫瘤生長(zhǎng)率及平均生存時(shí)間.結(jié)論:包載反義RNA重組腺病毒微球是一種包封率較高,載病毒量較大,能保持病毒活性,并能較長(zhǎng)時(shí)間釋放,轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高的載體.體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),可有效抑制MRPmRNA的表達(dá),增加HepG<,2>/ADM耐藥細(xì)胞內(nèi)化療藥物的濃度,提高耐藥細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,包載反義RNA重組腺病毒微球經(jīng)肝動(dòng)脈注射,并結(jié)扎肝動(dòng)脈,可顯著縮小腫瘤體積,顯著降低